DB34/T 1373-2025 动物组织中氯丙嗪的残留测定 酶联免疫吸附法

该文件为安徽省地方标准（DB34/T 1373-2025），规定了动物组织（畜禽肌肉、肝脏、肾脏及禽蛋）中氯丙嗪残留的酶联免疫吸附测定方法，替代2011版标准，主要修订内容如下：

​一、适用范围​

• ​检测对象​：畜禽肌肉、肝脏、肾脏及新增的禽蛋。
• ​应用场景​：快速筛选测定氯丙嗪残留量，检出限为 ​0.5 μg/kg，阳性结果需用色谱质谱联用法确认。

​二、方法原理​

• ​竞争性免疫反应​：样品中氯丙嗪与微孔板包被抗原竞争结合特异性抗体，通过酶标底物显色，450 nm处测定吸光度，吸光度与氯丙嗪浓度成反比。

​三、关键试剂与仪器​

1. ​试剂​
   • 氯丙嗪酶联免疫试剂盒（含酶标板、标准液、抗体工作液等，见附录A）。
   • 乙腈、正己烷、2.5%三氯乙酸溶液、12%氢氧化钠溶液。
2. ​设备​
   • 酶标仪（450 nm）、离心机（≥4000g）、匀质器、氮吹仪、微量加样器等。

​四、样品前处理​

1. ​试样制备​
   • ​畜禽组织​：去筋膜后粉碎均质（10000 rpm，2 min）。
   • ​禽蛋​：去壳后蛋清蛋黄混匀。
2. ​提取步骤​
   • 称取2 g样品，加入2 mL三氯乙酸、6 mL乙腈，涡旋离心后取上层液。
   • 经氢氧化钠调节pH，正己烷萃取，氮吹干燥后用复溶工作液复溶。
3. ​保存条件​
   • 4℃保存3-4天，-18℃以下保存6个月。

​五、测定流程​

1. ​操作条件​：室温（20-25℃），试剂平衡至室温后使用。
2. ​加样与反应​
   • 标准液与样品平行双孔加入，每孔加50 μL样品液+50 μL抗体工作液，避光反应60 min。
3. ​洗涤与显色​
   • 洗涤4次（260 μL/孔），加入底物A/B混合液避光显色15-20 min，终止后5分钟内读数。

​六、结果计算与判定​

1. ​数据处理​
   • 计算相对吸光度（B/B₀×100%），通过标准曲线（半对数坐标）得出氯丙嗪浓度。
   • 残留量公式：
     X=A×V×fmX = /frac{A /times V /times f}{m}X=mA×V×f​
     （A为浓度μg/L，V=0.5 mL，f=稀释倍数，m=2 g）
2. ​判定标准​
   • 检出限0.5 μg/kg，结果保留三位小数；≥检出限需质谱确认。

​七、方法验证参数​

• ​灵敏度​：检出限0.5 μg/kg。
• ​准确度​：添加回收率80%-120%（2-5倍检出限）。
• ​精密度​：批内、批间变异系数≤30%。

​八、新增与修订要点​

1. ​新增禽蛋检测​：明确蛋类样品处理步骤。
2. ​结构调整​：分离试样制备、测定步骤与结果判定章节，增加术语定义。
3. ​技术更新​：优化提取流程（如正己烷萃取步骤）、试剂盒组成标准化（附录A）。

​附录A（试剂盒组成）​​

• 包括酶标板、标准液（0.0-1.0 μg/L）、抗体/酶标记物工作液、洗涤液、底物液等，使用前按比例稀释。

该标准通过规范化的前处理与检测流程，提升氯丙嗪残留测定的准确性与适用性，尤其扩展了禽蛋检测能力，为食品安全监管提供技术支持。