DB1302/T 374-2013 水产品中氯霉素检测技术规范
- 文件大小：210.65 KB
- 标准类型：食品地方标准
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-06-07
- 下载次数：
- 标签：
资料介绍
DB1302/T 374-2013《水产品中氯霉素检测技术规范》主要内容总结
1. 标准概述
- 标准性质：唐山市地方标准，适用于水产品中氯霉素残留的检测。
- 起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。
- 检测方法：涵盖三种技术：
- 胶体金免疫层析法（快速筛选，最低检测限1 μg/kg）
- 酶联免疫吸附法（ELISA）（快速筛选，最低检测限0.25 μg/kg）
- 高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）（确证检测，检出限0.1 μg/kg，定量限0.2 μg/kg）。
2. 规范性引用文件
- 引用GB/T 6682（实验室用水标准）、SC/T 3016（水产品抽样方法）、农业部781号公告-2-2006（HPLC-MS/MS法）、农业部1025号公告-26-2008（ELISA法）等。
3. 抽样方法
- 按SC/T 3016执行，确保样品代表性。
4. 胶体金免疫层析法
4.1 原理
竞争抑制免疫层析：氯霉素与金标抗体结合后，抑制其与检测线结合，显色强度与残留量负相关。
4.2 关键步骤
- 前处理：样品用乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，缓冲液复溶。
- 检测：滴加80 μL待测液于试纸条，10~15分钟内判读结果。
- 结果判定：
- 阴性：C线（质控线）和T线（检测线）均显色。
- 阳性：仅C线显色，T线不显色。
- 无效：C线不显色或仅T线显色。
5. 酶联免疫吸附法（ELISA）
5.1 原理
竞争ELISA：样品中氯霉素与酶标抗原竞争结合抗体，显色吸光度与残留量负相关。
5.2 关键步骤
- 前处理：按农业部1025号公告-26-2008操作（乙酸乙酯提取、正己烷净化）。
- 检测流程：
- 加样（标准品/样品+酶标物）。
- 室温反应30分钟，洗涤后显色（TMB，20分钟）。
- 450 nm测吸光度。
- 结果计算：
- 以标准曲线计算百分吸光度（B/B₀），回归方程定量。
- 公式：氯霉素含量（μg/kg）= C（待测液浓度）×0.5（稀释倍数）。
6. 高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）
6.1 原理
内标法定量（间位氯霉素或氘代氯霉素），通过固相萃取净化，HPLC-MS/MS分离检测。
6.2 关键步骤
- 前处理：
- 乙腈和氯化钠溶液提取，正己烷脱脂。
- 乙酸乙酯萃取，旋转蒸干后C18柱净化。
- 氮吹浓缩，流动相复溶后过0.22 μm滤膜。
- 仪器条件：
- 按农业部781号公告-2-2006执行，需电喷雾电离源（ESI）。
- 标准曲线：氯霉素浓度0.5~10 ng/mL，内标5 ng/mL。
- 性能指标：
- 回收率70%~120%（0.1~10 μg/kg）。
- 精密度：批内/批间RSD≤20%。
7. 方法对比与适用性
| 方法 | 检测限 | 用途 | 特点 |
|---|---|---|---|
| 胶体金免疫层析法 | 1 μg/kg | 快速筛查 | 操作简单，15分钟出结果 |
| ELISA | 0.25 μg/kg | 实验室筛选 | 灵敏度高，需酶标仪 |
| HPLC-MS/MS | 0.1 μg/kg（检出） | 确证检测 | 高特异性，复杂前处理 |
8. 其他要求
- 储存条件：试剂避光冷藏，检测条开封后1小时内使用。
- 质量控制：每批检测需包含空白、加标样品验证准确度和精密度。
总结：该标准提供了从快速筛查到确证检测的完整技术方案，覆盖不同场景需求，确保水产品中氯霉素残留检测的可靠性。