YY/T 1963-2025 结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒（荧光PCR法）

　　ICS11.100.10

　　CCS C44

　　中华人民共和国医药行业标准

　　YY/T1963—2025

　　结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒

　　(荧光PCR 法)

　　Colorectalcancerrelatedgenemethylationdetectionkit

　　(FluorescentPCR )

　　2025-06-18发布2026-07-01实施

　　国家药品监督管理局发布

　　前 言

　　本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定

　　起草。

　　请 注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由国家药品监督管理局提出。

　　本文件由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC136)归口。

　　本文件起草单位:中国食品药品检定研究院、深圳华大基因股份有限公司、广州达安基因股份有限

　　公司、河南省药品医疗器械检验院(河南省疫苗批签中心)、厦门艾德生物医药科技股份有限公司、广州

　　康立明生物科技股份有限公司、博尔诚(北京)科技有限公司、上海透景生命科技股份有限公司、上海鹍

　　远健康科技有限公司、南方医科大学南方医院、陕西省食品药品检验研究院、广州市宝创生物技术有限

　　公司。

　　本 文件主要起草人:曲守方、于竞、蒋析文、张娟丽、李有彩、李勐、刘兴凤、郭安亮、刘蕊、郑磊、蔡虎、

　　潘腾飞、闵红、汪宇盈、苑富强、于婷、张文新、贾峥、孙楠、李丽莉、黄杰。

　　Ⅰ

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　　结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒

　　(荧光PCR 法)

　　1 范围

　　本文件规定了结直肠癌相关基因甲基化检测试剂盒的要求,标签和使用说明以及包装、运输和贮

　　存,描述了相应的试验方法。

　　本文件适用于定性检测外周血血浆和粪便样本的结直肠癌相关基因甲基化状态,如Septin9、

　　SDC2、BCAT1、SFRP2、TFPI2、NDRG4和BMP3等基因。

　　本文件适用于荧光PCR法、PCR荧光探针法等方法的试剂盒,不适用于高通量测序法的试剂盒。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文

　　件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于

　　本文件。

　　GB/T191 包装储运图示标志

　　GB/T29791.2 体外诊断医疗器械 制造商提供的信息(标示) 第2部分:专业用体外诊断试剂

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　DNA 甲基化 DNA methylation

　　在DNA 甲基化转移酶的催化作用下,将一个甲基基团添加在DNA 分子的碱基上。最常见的是将

　　甲基基团加在CpG二核苷酸胞嘧啶的第5位碳原子上,形成5-甲基胞嘧啶(5mC)。

　　3.2

　　亚硫酸氢盐转化 bisulfiteconversion

　　用亚硫酸氢盐诱导DNA 氧化脱氨,非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持

　　不变。

　　4 要求

　　4.1 外观

　　试剂盒应符合制造商规定的外观要求。试剂盒各组分应齐全、完整,无液体渗漏。

　　4.2 核酸提取功能

　　核酸提取功能应符合如下要求:

　　a) 含有核酸提取组分的试剂盒,制造商应对核酸提取做适当要求,并对核酸提取功能进行验

　　证,如充分考虑样本提取过程存在的干扰因素;

　　b) 样本需要提取,但不含有核酸提取组分的试剂盒,由制造商说明或指定提取试剂盒,并提供验

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　　证资料;

　　c) 样本不单独体现提取步骤,直接进行亚硫酸氢盐转化的试剂盒,制造商应对整体试验环节的提

　　取功能做适当要求,并提供验证资料。

　　4.3 转化功能

　　亚硫酸氢盐转化功能应符合如下要求:

　　a) 含有亚硫酸氢盐转化组分的试剂盒,制造商应对亚硫酸氢盐转化功能做适当要求,并进行验

　　证,如甲基化转化率等;

　　b) 不含有亚硫酸氢盐转化组分的试剂盒,由制造商说明或指定转化试剂盒,并提供验证资料。

　　4.4 阳性符合率

　　检测国家阳性参考品或企业阳性参考品,结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。

　　阳性参考品的设置应包括不同甲基化比例的甲基化阳性的结直肠癌样本,甲基化比例宜包括不低

　　于70%、不高于40%、不高于检出限甲基化比例的3倍。

　　4.5 阴性符合率

　　检测国家阴性参考品或企业阴性参考品,结果应为结直肠癌相应基因甲基化阴性。

　　阴性参考品的设置遵循以下原则:

　　a) 包括肠镜结果无异常的正常人样本;

　　b) 包括结直肠良性病变和临床常见的消化道良性疾病(如肠道炎症)样本;

　　c) 包括其他消化道肿瘤样本。

　　4.6 检出限

　　对于粪便样本检测试剂盒,检测浓度不高于2ng/μL或基因组20ng背景下,甲基化比例不高于

　　2%的国家检出限参考品或企业检出限参考品,结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。

　　对于血浆样本检测试剂盒,检测浓度不高于1ng/μL或基因组30ng背景下,甲基化比例不高于

　　1%的国家检出限参考品或企业检出限参考品,结果应为结直肠癌相应基因甲基化阳性。

　　4.7 重复性

　　检测甲基化阳性的重复性参考品,平行检测10次,结果应均为结直肠癌相应基因甲基化阳性,且相

　　应检测通道Ct值的变异系数(CV,%)应不高于5.0%。

　　检测甲基化阴性的重复性参考品,平行检测10次,结果应均为结直肠癌相应基因甲基化阴性,且内

　　参或内标检测通道Ct值的变异系数(CV,%)应不高于5.0%。

　　4.8 稳定性

　　制造商应规定试剂盒的有效期。取到有效期后一定时间内的试剂盒,检测其阳性符合率、阴性符合

　　率、检出限和重复性,应符合4.4~4.7的要求。

　　5 试验方法

　　5.1 外观

　　在自然光下,以正常视力或矫正视力目视检查,判定结果是否符合4.1的要求。

　　2

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　　5.2 核酸提取功能

　　按照制造商提供的方法进行试验,判定结果是否符合4.2的要求。

　　5.3 转化功能

　　按照制造商提供的方法进行试验,判定结果是否符合4.3的要求。

　　5.4 阳性符合率

　　检测阳性参考品,每份检测1次,判定结果是否符合4.4的要求。

　　5.5 阴性符合率

　　检测阴性参考品,每份检测1次,判定结果是否符合4.5的要求。

　　5.6 检出限

　　检测检出限参考品,每份检测1次,判定结果是否符合4.6的要求。

　　5.7 重复性

　　检测阳性重复性参考品和阴性重复性参考品,每份检测10次,计算检测结果的平均值(X )和标准

　　差(SD ),按照公式(1)计算变异系数(CV),判定结果是否符合4.7的要求。

　　CV=SD/X ×100% …………………………(1)

　　式中:

　　SD ———10次测试结果的标准差;

　　X ———10次测试结果的平均值。

　　5.8 稳定性

　　按照5.4~5.7的方法进行检测,判定结果是否符合4.8的要求。

　　6 标签和使用说明

　　应符合GB/T29791.2的规定。

　　7 包装、运输和贮存

　　7.1 包装

　　应符合GB/T191的规定。

　　7.2 运输

　　试剂盒应按制造商的要求运输。在运输过程中,应防潮,防止重物堆压,避免阳光直射和雨雪浸

　　淋,防止与酸碱物质接触,防止内外包装破损。

　　7.3 贮存

　　试剂盒应在制造商规定条件下保存。

　　3

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　　参 考 文 献

　　[1] YY/T0466.1—2023 医疗器械 用于制造商提供信息的符号 第1部分:通用要求

　　[2] YY/T1182—2020 核酸扩增检测用试剂(盒)

　　[3] YY/T1586—2018 肿瘤个体化治疗相关基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)

　　[4] 薛开先.表[观]遗传学词典[M].北京:人民卫生出版社,2016.

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