超清版 GB/T 44610-2024 食用菌病害检疫鉴定方法
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- 标准类型：农牧渔类
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-03-18
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资料介绍
食用菌病害检疫鉴定方法
Diagnostic protocol for diseases in edible mushrooms
ICS 65.020.20
CCS B 16
中华人民共和国国家标准
GB/T 44610—2024
2024-09-29 发布2025-04-01 实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会发 布
前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规
定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出并归口。
本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院。
本文件主要起草人：王聪、姜帆、吴品珊、田茜。
GB/T 44610—2024
Ⅰ
食用菌病害检疫鉴定方法
1 范围
本文件描述了食用菌病害的检疫鉴定方法。
本文件适用于检测和鉴定国内生产和进口的各类食用菌子实体的真菌病害、细菌病害和病毒病害。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用
于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 12728 食用菌术语
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
GB/T 27402 实验室质量控制规范 植物检疫
GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
3 术语和定义
GB/T 12728 界定的术语和定义适用于本文件。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
Ct：循环阈值（Cycle Threshold）
CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide）
DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid）
OD：光密度（Optical Density）
PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）
PDA：马铃薯葡萄糖琼脂（Potato Dextrose Agar）
RNA：核糖核酸（Ribonucleic Acid）
RT﹘PCR：反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription﹘Polymerase Chain Reaction）
5 总体要求
根据病害种类的不同，一般根据形态学特征、分子生物学特征、致病性特征、生理生化特征等进行
种类鉴定，应采用多种检测方法综合进行结果判定。
在整个试验操作过程中应采用安全有效的防护措施，具体要求应符合GB 19489、GB/T 27402、
GB/T 27403 的规定。
GB/T 44610—2024
1
6 仪器及用具
6.1 仪器设备
6.1.1 生物光学显微镜。
6.1.2 电子显微镜。
6.1.3 低温冰箱。
6.2 试验用具
6.2.1 解剖针。
6.2.2 标签。
6.2.3 镊子。
6.2.4 PCR 管（0.2 mL）。
6.3 试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。
6.3.1 水：GB/T 6682，三级。
6.3.2 琼脂糖（C10H15N3O3）。
7 现场取样
宜挑选子实体表面有腐烂、斑点、变色、霉层、畸形等症状的样品，如无明显症状，尽量从不同部
位多点取样，用标签做好标记，带回实验室进行检测鉴定。常见重要食用菌病害症状描述见附录A。
8 病害检疫鉴定
8.1 形态学鉴定
8.1.1 真菌病害
若发病处可见病菌，则直接用镊子或解剖针挑取寄主发病处的病菌，或取分离纯化培养生长5 d～
7 d 后的病菌平板培养物，在普通生物光学显微镜下观察病原菌的形态特征。
在10 × 20、10 × 40 放大倍数下进行观测，随机选取10 个～15 个视野，测量并观察病原菌无性态
（如分生孢子器、分生孢子等）以及有性态（如子囊壳、子囊孢子等）的大小、形态、颜色等，并进行
数码显微拍摄对测量数值进行记录。对于分离培养的病菌，同时观察菌落的形态、颜色变化等，拍照留
存并对病原菌进行类别判定。
真菌的分离、纯化及保存方式见附录B。
8.1.2 细菌病害
对于疑似细菌性病害在进行病原分离之前，先切取食用菌发病部分组织做“细菌溢”检查，如在光
学显微镜下观察到明显喷菌现象，再进行细菌的组织分离。
将食用菌发病部位剪成小块（约0.2 cm × 0.2 cm）进行分离纯化，革兰氏染色，观察其菌体；还
可通过相应的染色方法观察其是否具有鞭毛、荚膜等，具体方法见附录C。对所观察的形态特征进行拍
照留存，并对病原菌进行类别判定。
细菌的分离、纯化及保存方式见附录B。
GB/T 44610—2024
2
8.1.3 病毒病害
对于病毒病害，通过粗提的方法得到子实体的病毒粒子，对其进行负染，借助电子显微镜观察其形
态特征，获取病毒粒子的形态大小、内部结构和有无包膜等信息。对所观察的形态特征进行拍照留存，
对病毒进行类别判定。
8.2 分子生物学检测
8.2.1 核酸提取
取分离纯化得到的真菌或细菌菌落进行DNA 提取，疑似病毒病害的样品一般进行DNA 和RNA 提
取。核酸提取方法可采用CTAB 法、Trizol 法、试剂盒法等，按照不同提取方法的说明书操作。核酸提
取后检测核酸浓度和纯度，并做好记录，纯度较高的DNA OD260/OD280 值（OD260 指核酸在260 nm 的
吸光值，OD280 指蛋白质在280 nm 的吸光值）应为1.7～1.9，纯度较高的RNA OD260/OD280 值应为
1.8～2.0。提取后的核酸在4 ℃ 冰箱保存备用，长期保存置于-20 ℃ 或-80 ℃ 冰箱。
8.2.2 PCR 扩增
根据检测目的和对象的不同，可采用核酸序列测定、常规PCR、实时荧光PCR 以及RT﹘PCR 等不
同的PCR 扩增方法。根据实际情
Diagnostic protocol for diseases in edible mushrooms
ICS 65.020.20
CCS B 16
中华人民共和国国家标准
GB/T 44610—2024
2024-09-29 发布2025-04-01 实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会发 布
前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规
定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出并归口。
本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院。
本文件主要起草人：王聪、姜帆、吴品珊、田茜。
GB/T 44610—2024
Ⅰ
食用菌病害检疫鉴定方法
1 范围
本文件描述了食用菌病害的检疫鉴定方法。
本文件适用于检测和鉴定国内生产和进口的各类食用菌子实体的真菌病害、细菌病害和病毒病害。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用
于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 12728 食用菌术语
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
GB/T 27402 实验室质量控制规范 植物检疫
GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
3 术语和定义
GB/T 12728 界定的术语和定义适用于本文件。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
Ct：循环阈值（Cycle Threshold）
CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide）
DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid）
OD：光密度（Optical Density）
PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）
PDA：马铃薯葡萄糖琼脂（Potato Dextrose Agar）
RNA：核糖核酸（Ribonucleic Acid）
RT﹘PCR：反转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription﹘Polymerase Chain Reaction）
5 总体要求
根据病害种类的不同，一般根据形态学特征、分子生物学特征、致病性特征、生理生化特征等进行
种类鉴定，应采用多种检测方法综合进行结果判定。
在整个试验操作过程中应采用安全有效的防护措施，具体要求应符合GB 19489、GB/T 27402、
GB/T 27403 的规定。
GB/T 44610—2024
1
6 仪器及用具
6.1 仪器设备
6.1.1 生物光学显微镜。
6.1.2 电子显微镜。
6.1.3 低温冰箱。
6.2 试验用具
6.2.1 解剖针。
6.2.2 标签。
6.2.3 镊子。
6.2.4 PCR 管（0.2 mL）。
6.3 试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。
6.3.1 水：GB/T 6682，三级。
6.3.2 琼脂糖（C10H15N3O3）。
7 现场取样
宜挑选子实体表面有腐烂、斑点、变色、霉层、畸形等症状的样品，如无明显症状，尽量从不同部
位多点取样，用标签做好标记，带回实验室进行检测鉴定。常见重要食用菌病害症状描述见附录A。
8 病害检疫鉴定
8.1 形态学鉴定
8.1.1 真菌病害
若发病处可见病菌，则直接用镊子或解剖针挑取寄主发病处的病菌，或取分离纯化培养生长5 d～
7 d 后的病菌平板培养物，在普通生物光学显微镜下观察病原菌的形态特征。
在10 × 20、10 × 40 放大倍数下进行观测，随机选取10 个～15 个视野，测量并观察病原菌无性态
（如分生孢子器、分生孢子等）以及有性态（如子囊壳、子囊孢子等）的大小、形态、颜色等，并进行
数码显微拍摄对测量数值进行记录。对于分离培养的病菌，同时观察菌落的形态、颜色变化等，拍照留
存并对病原菌进行类别判定。
真菌的分离、纯化及保存方式见附录B。
8.1.2 细菌病害
对于疑似细菌性病害在进行病原分离之前，先切取食用菌发病部分组织做“细菌溢”检查，如在光
学显微镜下观察到明显喷菌现象，再进行细菌的组织分离。
将食用菌发病部位剪成小块（约0.2 cm × 0.2 cm）进行分离纯化，革兰氏染色，观察其菌体；还
可通过相应的染色方法观察其是否具有鞭毛、荚膜等，具体方法见附录C。对所观察的形态特征进行拍
照留存，并对病原菌进行类别判定。
细菌的分离、纯化及保存方式见附录B。
GB/T 44610—2024
2
8.1.3 病毒病害
对于病毒病害，通过粗提的方法得到子实体的病毒粒子，对其进行负染，借助电子显微镜观察其形
态特征，获取病毒粒子的形态大小、内部结构和有无包膜等信息。对所观察的形态特征进行拍照留存，
对病毒进行类别判定。
8.2 分子生物学检测
8.2.1 核酸提取
取分离纯化得到的真菌或细菌菌落进行DNA 提取，疑似病毒病害的样品一般进行DNA 和RNA 提
取。核酸提取方法可采用CTAB 法、Trizol 法、试剂盒法等，按照不同提取方法的说明书操作。核酸提
取后检测核酸浓度和纯度，并做好记录，纯度较高的DNA OD260/OD280 值（OD260 指核酸在260 nm 的
吸光值，OD280 指蛋白质在280 nm 的吸光值）应为1.7～1.9，纯度较高的RNA OD260/OD280 值应为
1.8～2.0。提取后的核酸在4 ℃ 冰箱保存备用，长期保存置于-20 ℃ 或-80 ℃ 冰箱。
8.2.2 PCR 扩增
根据检测目的和对象的不同，可采用核酸序列测定、常规PCR、实时荧光PCR 以及RT﹘PCR 等不
同的PCR 扩增方法。根据实际情