DB34/T 5100-2025 小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程

以下是DB34/T 5100-2025《小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程》的详细内容总结：

​​1. 范围​​

• 适用于监测小麦赤霉病菌（Fusarium spp.）对 ​​7类常用杀菌剂​​的抗药性。
• 涵盖监测对象、样品采集与病原菌分离、敏感性基线建立、敏感性测定、抗药性评价及菌株处理等全流程。

​​2. 监测对象（7类杀菌剂）​​

​​3. 样品采集与病原菌分离​​

• ​​采集要求​​：
  • 小麦收获前在县级监测点采集典型赤霉病病穗。
  • 样品存放于纸质袋，记录采样人、品种、用药史、地点。
  • 干燥保存防霉变。
• ​​病原菌分离​​：
  • 无菌条件下挑取病粒，置于含 ​​50μg/mL五氯硝基苯 + 100μg/mL硫酸链霉素​​ 的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基。

​​4. 敏感性基线建立​​

• 参照 ​​NY/T 1859.6​​（农药抗性风险评估第6部分）的方法建立杀菌剂敏感性基线。

​​5. 敏感性测定方法​​

​​(1) 菌丝生长速率法（适用多数药剂）​​

• ​​步骤​​：
  • 配制含 ​​区分剂量​​ 药剂的培养基。
  • 接种病原菌，25℃黑暗培养3天。
  • ​​判定​​：能生长者为抗性菌株，不生长者为敏感菌株。
• ​​依据标准​​：NY/T 1156.2（抑制病原真菌菌丝生长试验）。

​​(2) 孢子萌发法（适用甲氧基丙烯酸酯类、吡唑酰胺类）​​

• ​​步骤​​：
  • 制备孢子悬浮液（浓度 10^4 /sim 10^5 个/mL）。
  • 涂布于含梯度浓度药剂的水琼脂平板。
  • 25℃黑暗培养6~8小时，显微镜下观察孢子萌发（芽管≥孢子宽度1/2即为萌发）。
  • 计算 EC_{50}（抑制50%孢子萌发的药剂浓度）及抗药性指数。
• ​​依据标准​​：NY/T 1156.1（抑制孢子萌发试验）。

​​6. 抗药性评价​​

​​(1) 抗药性频率（风险等级）​​

• 公式：

  /text{抗药性频率} = /frac{/text{抗药性菌株数}}{/text{测定总菌株数}} /times 100/%

• ​​分级​​：
  • <5%：​​低风险​​
  • 5%~10%：​​中风险​​

  • 10%：​​高风险​​

​​(2) 抗药性指数（抗性水平）​​

• 公式：

  /text{抗药性指数} = /frac{/text{抗药性菌株的 } EC_{50} /text{ 或 } MIC}{/text{敏感基线菌株的 } EC_{50} /text{ 或 } MIC}

• ​​分级​​：
  • 5~20：​​低抗性水平​​
  • 20~100：​​中抗性水平​​

  • 100：​​高抗性水平​​

​​7. 抗药性菌株及样品处理​​

• ​​菌株保存​​：抗性菌株置于含PDA培养基的冻存管中。
• ​​样品灭活​​：分离后的样品需经高温灭活处理。

​​关键规范性引用文件​​

• NY/T 1156.1：孢子萌发试验（凹玻片法）。
• NY/T 1156.2：菌丝生长试验（平皿法）。
• NY/T 1859.6：灰霉病菌抗药性风险评估方法（用于敏感性基线建立）。

​​核心目标​​

为安徽省小麦赤霉病菌抗药性监测提供标准化流程，指导科学用药和抗性治理，延缓抗药性发展。