DB21/T 4150-2025 水质 6种双酚类化合物的测定 固相萃取 高效液相色谱法

　　辽宁省地方标准

　　DB21/T 4150—2025

　　水质6 种双酚类化合物的测定

　　固相萃取/高效液相色谱法

　　Water quality—Determination of 6 bisphenol compounds—Solid phase

　　extraction/high performance liquid chromatography

　　2025 - 06 - 30 发布2025 - 07 - 30 实施

　　辽宁省市场监督管理局 发布

　　目次

　　前言.................................................................................. II

　　1 范围................................................................................. 1

　　2 规范性引用文件....................................................................... 1

　　3 术语和定义........................................................................... 1

　　4 方法原理............................................................................. 1

　　5 试剂和材料........................................................................... 1

　　6 仪器和设备........................................................................... 2

　　7 样品................................................................................. 3

　　8 分析步骤............................................................................. 4

　　9 结果计算与表示....................................................................... 5

　　10 准确度.............................................................................. 6

　　11 质量保证和质量控制.................................................................. 6

　　12 注意事项............................................................................ 6

　　附录A(规范性)方法的检出限和测定下限..................................................7

　　附录B(资料性)方法的准确度............................................................8

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　　II

　　前言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1 部分：标准化文件结构和起草规则》的规定

　　起草。

　　本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由辽宁省生态环境厅提出并归口。

　　本文件起草单位：辽宁省葫芦岛生态环境监测中心、辽宁省检验检测认证中心。

　　本文件主要起草人：张哲、杨惠、宋大英、赵宇、张明洋、付晓燕、付征宇、苑芷茜、陶冶、幺洪

　　波、郭振江、王文华、于志辉、张旭鸿、张立剑、李赫、宋婷、付娆、于群、滕维新、王美臻。

　　本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，

　　我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

　　归口管理部门通讯地址：辽宁省生态环境厅(辽宁省沈阳市浑南区双园路30号甲)，联系电话：

　　024-62788591。

　　标准起草单位通讯地址：辽宁省葫芦岛生态环境监测中心(辽宁省葫芦岛市龙港区龙湾大街24号)，

　　联系电话：0429-6661596。

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　　1

　　水质6 种双酚类化合物的测定固相萃取/高效液相色谱法

　　警告：实验中所使用的甲醇、乙腈、双酚类化合物、丙酮属于有毒有机物，溶液配制过程应在通风

　　橱内进行，操作时应按规定要求佩戴防护器具，避免吸入呼吸道、接触皮肤和衣物。

　　1 范围

　　本文件规定了测定水中双酚类化合物的高效液相色谱法。

　　本文件适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中双酚A、双酚B、双酚AP、双酚Z、四甲基双

　　酚A、双酚P共6种双酚类化合物的测定。

　　当取样体积为250 ml，试样的定容体积为1.0 ml，进样体积为20 μl时，方法检出限为0.03 μg/L～

　　0.06 μg/L，测定下限为0.12 μg/L～0.24 μg/L。详见附录A。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

　　仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

　　文件。

　　HJ 91.1 污水监测技术规范

　　HJ 91.2 地表水环境质量监测技术规范

　　HJ 164 地下水环境监测技术规范

　　HJ 493 水质样品的保存和管理技术规定

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 方法原理

　　水中的双酚类化合物在酸性条件下，经固相萃取富集、净化、洗脱、浓缩后使用具有荧光检测器的

　　高效液相色谱仪测定，根据保留时间定性，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　5.1 通用要求：除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的不含

　　目标化合物的纯水。

　　5.2 硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)：优级纯。

　　5.3 盐酸(HCl)：ρ(HCl)=1.19 g/ml，优级纯。

　　5.4 盐酸溶液：φ(HCl)=50%。量取100 ml 盐酸(5.3)，缓慢加入到100 ml 实验用水中，混匀。

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　　2

　　5.5 甲醇(CH3OH)：色谱纯。

　　5.6 甲醇溶液：φ(CH3OH)=30%。分别量取30 ml 甲醇(5.5)和70 ml 实验用水，混匀。

　　5.7 乙腈(CH3CN)：色谱纯。

　　5.8 二氯甲烷(CH2Cl2)：农残级。

　　5.9 丙酮(CH3COCH3)：农残级。

　　5.10 双酚A(C15H16O2)：纯度为≥99.9%。

　　5.11 双酚B(C16H18O2)：纯度为≥99.23%。

　　5.12 双酚P(C24H26O2)：纯度为≥97.4%。

　　5.13 双酚Z(C18H20O2)：纯度为≥99.6%。

　　5.14 双酚AP(C20H18O2)：纯度为≥99.9%。

　　5.15 四甲基双酚A(C19H24O2)：纯度为≥99.9%。

　　5.16 双酚类化合物标准贮备液(ρ =1000 μg/ml)

　　分别称取0.0100 g 双酚A(5.10)、双酚B(5.11)、双酚P(5.12)、双酚Z(5.13)、双酚AP

　　(5.14)和四甲基双酚A(5.15)置于50 ml 玻璃烧杯中，加少量甲醇(5.5)溶解，转移至10 ml 容

　　量瓶中，用甲醇(5.5)稀释至标线，混匀。制备的标准贮备液于4 ℃以下冷藏、密封、避光保存，保

　　存期为1 a。也可购买市售有证标准溶液，按标准溶液证书保存。

　　5.17 双酚类化合物标准中间液(ρ =100 μg/ml)

　　准确移取1.00 ml 双酚类化合物标准贮备液(5.16)于10 ml 容量瓶中，用甲醇(5.5)定容至标

　　线，标准中间液于4 ℃以下，冷藏、密封、避光保存，保存期为6 m。

　　5.18 双酚类化合物标准使用液(ρ =10 μg/ml)

　　准确移取1.00 ml 双酚类化合物标准中间液(5.17)于10 ml 容量瓶中，用甲醇(5.5)定容至标

　　线，标准使用液于4 ℃以下，冷藏、密封、避光保存，保存期为6 m。

　　5.19 石英滤膜：孔径为0.45 μm，使用前在400 ℃的马弗炉中烘烤2 h。

　　5.20 针头过滤器：有机系，孔径为0.45 μm，经甲醇(5.5)清洗晾干，确保没有目标物。

　　5.21 氮气：纯度≥99.99%。

　　6 仪器和设备

　　6.1 采样瓶：250 ml，棕色细口玻璃瓶，配玻璃塞。使用前可用实验用水、丙酮(5.9)依次清洗。

　　6.2 高效液相色谱仪(HPLC)：配备荧光检测器(FLD)。

　　6.3 色谱柱：填料粒径5 μm，柱长25 cm，内径4.6 mm 的C18 反相色谱柱，或其他等效色谱柱。

　　6.4 浓缩装置：氮吹仪等性能相当的浓缩装置。

　　6.5 固相萃取装置：自动或手动固相萃取仪，可连固相萃取柱。

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　　3

　　6.6 固相萃取柱：500 mg/6 ml，聚丙烯或者玻璃材质，填料为C18 或苯乙烯和二乙烯苯共聚物，或其

　　他等效固相萃取柱。

　　6.7 玻璃注射器：5 ml。

　　6.8 微量注射器：50 μl、100 μl、250 μl、1000 μl。

　　6.9 量筒：50 ml、100 ml、250 ml。

　　6.10 玻璃烧杯：50 ml、250 ml。

　　6.11 容量瓶：10 ml。

　　6.12 过滤装置：配有砂芯滤器和真空泵，抽滤压力勿超过-50 kPa。

　　6.13 超声波提取仪：超声频率不低于40 kHz，具备水温监控功能，保证样品充分接受超声萃取。

　　6.14 一般实验室常用仪器和设备。

　　7 样品

　　7.1 样品的采集与保存

　　按照HJ 91.1、HJ 91.2、HJ 164 、HJ 493 的相关规定进行样品采集和保存。用采样瓶(6.1)采

　　集样品，如样品中含有余氯，需向样品中加入硫代硫酸钠(5.2)，使样品中硫代硫酸钠的浓度为80 mg/L，

　　加盐酸溶液(5.4)调节样品pH 值为1～2。样品应充满采样瓶(6.1)并加盖密封，于4 ℃以下冷藏、

　　避光保存，7 d(168 h)内完成分析。

　　每批次样品应至少采集1个全程序空白样品，将250 ml实验用水放入样品瓶中密封，并带到采样现

　　场，与采样样品瓶同时开盖和密封，之后随样品运回实验室。

　　7.2 试样的制备

　　7.2.1 过滤

　　准确量取250.0 ml样品经石英滤膜(5.19)过滤，滤液置于250 ml玻璃烧杯(6.10)中，全部用于

　　固相萃取。过滤后的石英滤膜放入10 ml玻璃管中，加入适量甲醇(5.5)使滤膜完全浸没于甲醇中，超

　　声提取10 min，将超声提取液经针头过滤器(5.20)过滤后收集至浓缩瓶中。

　　注：若样品中不存在肉眼可见的悬浮物，无需过滤，准确量取250 ml样品进行固相萃取即可。

　　7.2.2 固相萃取

　　7.2.2.1 柱活化

　　依次用5 ml甲醇(5.5)和5 ml实验用水活化固相萃取柱(6.6)，在活化过程中，应确保固相萃取

　　柱中填料表面不露出液面。

　　7.2.2.2 上样

　　将过滤后的样品(7.2.1)，以3 ml/min～5 ml/min的流速通过固相萃取柱。

　　7.2.2.3 淋洗

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　　上样结束后，用10 ml甲醇溶液(5.6)淋洗固相萃取柱(6.6)，以去除固相萃取柱上的杂质，弃

　　去流出液，然后用氮气(5.21)吹干固相萃取柱。

　　7.2.2.4 洗脱

　　以2 ml/min～4 ml/min的流速，分别用2 ml甲醇(5.5)和5 ml二氯甲烷(5.8)洗脱，收集洗脱液

　　至浓缩瓶中。

　　注：其他固相萃取的方式，经验证满足要求，也可适用于本方法。

　　7.2.3 浓缩

　　将提取液(7.2.1)和洗脱液(7.2.2)合并后，用浓缩装置(6.4)浓缩到0.5～1 ml，加入3 ml

　　甲醇(5.5)，再浓缩至约1 ml，将溶剂完全置换为甲醇后，用甲醇(5.5)定容至1.0 ml，用针头过滤

　　器(5.20)过滤后待测。

　　注：置换溶剂时，不要将溶剂吹干，重复置换操作2～3次。

　　7.3 空白试样的制备

　　7.3.1 实验室空白

　　用实验用水代替样品，按照与试样的制备(7.2)相同的操作步骤，制备实验室空白试样。

　　7.3.2 全程序空白

　　全程序空白样品(7.1)，按照与试样的制备(7.2)相同的操作步骤，制备全程序空白试样。

　　8 分析步骤

　　8.1 色谱参考条件

　　流动相A：乙腈(5.7)，流动相B：实验用水;柱温：30 ℃;进样体积：20 μL;荧光检测器：激

　　发波长227 nm，发射波长313 nm;洗脱程序见表1。

　　表1 洗脱程序

　　时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(%) 流动相B(%)

　　0.0 1.0 70 30

　　2.0 1.0 70 30

　　3.0 0.7 70 30

　　10.0 0.7 70 30

　　注：不具自动清洗程序的仪器，可在10 min后延长2～3 min的清洗平衡时间。

　　8.2 标准曲线的建立

　　分别移取一定量的双酚类化合物标准使用液(5.18)，用甲醇(5.5)逐级稀释，配制至少5个浓度

　　点的标准系列，各组分质量浓度分别为50.0 μg/L、100 μg/L、250 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L

　　(此为参考浓度)，按照色谱参考条件(8.1)，由低浓度到高浓度依次进样，以目标化合物浓度为横

　　坐标，以峰面积(或峰高)为纵坐标，建立荧光检测器的标准曲线。

　　8.3 试样的测定

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　　将制备好的试样(7.2)，按照与绘制标准曲线相同的测定条件(8.2)进行测定。当试样浓度超出

　　标准曲线浓度范围时，应适当稀释后测定。

　　8.4 空白试验

　　按照与试样的测定(8.3)相同的步骤，进行空白试样(7.3)的测定。

　　9 结果计算与表示

　　9.1 定性分析

　　根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性。必要时可以用高效液相色谱

　　-质谱仪做进一步确认。

　　在本文件规定的色谱参考条件(8.1)下，目标化合物的标准色谱图见图1。

　　1—双酚A;2—双酚B;3—双酚AP;4—双酚Z;5—四甲基双酚A;6—双酚P。

　　图1 双酚类化合物标准色谱图(?=500 μg/L)

　　9.2 结果计算

　　样品中目标化合物的浓度，按照公式(1)进行计算。

　　?= ?1×?1

　　? × ?

　　式中：? ——样品中目标化合物的浓度，μg/L;

　　?1——由标准曲线计算所得的目标化合物浓度，μg/L;

　　?1——试样的定容体积，ml;

　　? ——取样体积，ml;

　　? ——试样的稀释倍数。

　　注：当试样浓度超出标准曲线的范围，应对试样进行稀释。

　　9.3 结果表示

　　测定结果小数点后的位数与方法检出限一致，最多保留3位有效数字。

　　检出限详见附录A中表A.1。

　　min

　　··········································(1)

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　　10 准确度

　　10.1 精密度

　　3家实验室分别对加标样品进行6次重复测定，加标量分别为实验用水0.050 μg、地下水0.200 μg

　　和工业废水0.750 μg。

　　实验室内相对标准偏差分别为：1.7%～9.0%，0.30%～8.7%，0.20%～5.5%。

　　实验室间相对标准偏差分别为：2.3%～16%，8.8%～16%，1.5%～9.6%。

　　重复性限范围分别为：0.01 μg～0.01 μg，0.02 μg～0.03 μg，0.04 μg～0.07 μg。

　　再现性限范围分别为：0.01 μg～0.02 μg，0.05 μg～0.08 μg，0.07 μg～0.2 μg。

　　精密度结果参见附录B中表B.1。

　　10.2 正确度

　　3家实验室分别对加标样品进行6次重复测定，加标量分别为实验用水0.050 μg、地下水0.200 μg、

　　地表水0.500 μg、生活污水0.500 μg和工业废水0.750 μg。

　　实验用水加标回收率范围为：71.3%～109%，加标回收率最终值为95.0%±19.3%。

　　地下水加标回收率范围为：70.2%～105%，加标回收率最终值为89.7%±21.6%。

　　地表水加标回收率范围为：72.5%～111%，加标回收率最终值为92.6%±22.1%。

　　生活污水加标回收率范围为：61.2%～107%，加标回收率最终值为85.6%±25.5%。

　　工业废水加标回收率范围为：73.4%～101%，加标回收率最终值为85.4%±15.1%。

　　正确度结果参见附录B中表B.2。

　　11 质量保证和质量控制

　　11.1 空白试验

　　每20个样品或每批次(≤20个样品)应至少测定1个实验室空白样品和1个全程序空白样品，测定结

　　果应小于方法检出限。

　　11.2 标准曲线

　　每批样品应绘制标准曲线，标准曲线相关系数应≥0.999，否则应查找原因，重新绘制标准曲线。

　　每分析20个样品或每批次(≤20个样品)应测定1个标准曲线中间浓度点，其测定结果与标准曲线

　　该点浓度的相对误差应在±20%以内，否则应重新绘制标准曲线。

　　11.3 平行样测定

　　每20个样品或每批次(≤20个样品)应至少分析1个平行样，平行样的相对偏差应在±20%以内。

　　11.4 基体加标

　　每20个样品或每批次(≤20个样品)应做1个基体加标样，基体加标回收率应控制在60%～120%之间。

　　12 注意事项

　　在样品采集、前处理及分析过程中不得使用含有目标化合物的器皿及耗材。

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　　A

　　A

　　附录A

　　(规范性)

　　方法的检出限和测定下限

　　表A.1规定了方法的检出限和测定下限。

　　表A.1 方法的检出限和测定下限

　　序号化合物名称英文简称CAS No.

　　检出限

　　(μg/L)

　　测定下限

　　(μg/L)

　　1 双酚A BPA 80-05-7 0.04 0.16

　　2 双酚B BPB 77-40-7 0.04 0.16

　　3 双酚AP BPAP 1571-75-1 0.05 0.20

　　4 双酚Z BPZ 843-55-0 0.06 0.24

　　5 四甲基双酚A TMBPA 5613-46-7 0.03 0.12

　　6 双酚P BPP 2167-51-3 0.05 0.20

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　　B

　　B

　　附录B

　　(资料性)

　　方法的准确度

　　采用高效液相色谱法，测定不同浓度加标样品的精密度和正确度，方法的精密度结果见表B.1，方

　　法的正确度结果见表B.2。

　　表B.1 方法的精密度

　　化合物名称样品类型

　　加标量

　　(μg)

　　平均值

　　(μg)

　　实验室内相对

　　标准偏差(%)

　　实验室间相对

　　标准偏差(%)

　　重复性限

　　(μg)

　　再现性限

　　(μg)

　　双酚A

　　实验用水0.050 0.050 3.2～6.4 8.6 0.01 0.01

　　地下水0.200 0.191 0.3～6.0 14 0.02 0.08

　　工业废水0.750 0.688 0.2～4.6 7.9 0.06 0.16

　　双酚B

　　实验用水0.050 0.051 3.7～6.3 4.7 0.01 0.01

　　地下水0.200 0.180 0.4～8.7 15 0.03 0.08

　　工业废水0.750 0.698 0.3～5.0 9.6 0.06 0.20

　　双酚AP

　　实验用水0.050 0.050 4.4～7.3 2.3 0.01 0.01

　　地下水0.200 0.183 1.9～6.4 14 0.03 0.07

　　工业废水0.750 0.676 0.8～3.0 8.2 0.04 0.16

　　双酚Z

　　实验用水0.050 0.045 4.5～9.0 4.0 0.01 0.01

　　地下水0.200 0.188 2.2～6.0 8.8 0.03 0.05

　　工业废水0.750 0.713 1.1～5.1 6.7 0.06 0.14

　　四甲基双酚A

　　实验用水0.050 0.047 4.1～4.9 14 0.01 0.02

　　地下水0.200 0.170 2.7～7.9 12 0.03 0.06

　　工业废水0.750 0.699 1.6～5.5 1.5 0.07 0.07

　　双酚P

　　实验用水0.050 0.043 1.7～7.7 16 0.01 0.02

　　地下水0.200 0.170 5.2～8.1 16 0.03 0.08

　　工业废水0.750 0.643 2.7～5.0 6.8 0.07 0.13

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　　9

　　表B.2 方法的正确度

　　化合物名称样品类型加标量(μg) 回收率范围(%) ?(%) SP(%) ?±2??(%)

　　双酚A

　　实验用水0.050 91.7～109 100 8.7 100±17.4

　　地下水0.200 79.0～105 92.6 13.0 92.6±26.0

　　地表水0.500 87.4～107 97.7 9.8 97.7±19.6

　　生活污水0.500 86.5～98.7 93.3 6.2 93.3±12.4

　　工业废水0.750 83.3～100 88.9 9.7 88.9±19.4

　　双酚B

　　实验用水0.050 97.0～107 102 4.8 102±9.6

　　地下水0.200 74.5～101 89.8 13.7 89.8±27.4

　　地表水0.500 96.7～105 99.7 4.6 99.7±9.2

　　生活污水0.500 78.1～104 92.6 13.2 92.6±26.4

　　工业废水0.750 79.8～101 89.8 10.6 89.8±21.2

　　双酚AP

　　实验用水0.050 98.0～102 99.6 2.1 99.6±4.2

　　地下水0.200 78.8～103 91.4 12.3 91.4±24.6

　　地表水0.500 84.4～101 93.4 8.3 93.4±16.6

　　生活污水0.500 81.5～99.2 89.0 9.2 89.0±18.4

　　工业废水0.750 79.9～95.7 88.7 8.1 88.7±16.2

　　双酚Z

　　实验用水0.050 87.3～94.7 90.9 3.7 90.9±7.4

　　地下水0.200 84.7～101 94.1 8.3 94.1±16.6

　　地表水0.500 94.0～111 100 9.8 100±19.6

　　生活污水0.500 84.5～107 90.9 13.7 90.9±27.4

　　工业废水0.750 77.7～87.9 83.3 5.2 83.3±10.4

　　四甲基双酚A

　　实验用水0.050 81.0～107 93.9 13.0 93.9±26.0

　　地下水0.200 73.2～91.0 84.9 10.1 84.9±20.2

　　地表水0.500 89.3～94.3 91.5 2.6 91.5±5.2

　　生活污水0.500 78.4～87.8 81.9 5.2 81.9±10.4

　　工业废水0.750 81.9～82.8 82.4 0.4 82.4±0.8

　　双酚P

　　实验用水0.050 71.3～94.7 83.6 11.7 83.6±23.4

　　地下水0.200 70.2～97.9 85.2 14.0 85.2±28.0

　　地表水0.500 72.6～75.6 73.6 1.8 73.6±3.6

　　生活污水0.500 61.2～72.1 65.6 5.7 65.6±11.4

　　工业废水0.750 73.4～86.6 79.3 6.7 79.3±13.4