GB 5009.83-2016 食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定 含2025年第1号修改单

中华人民共和国国家标准
GB5009.83—2016
食品安全国家标准
食品中胡萝卜素的测定
2016-12-23发布2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
国家食品药品监督管理总局发布
前 言
本标准代替GB5413.35—2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定》、
GB/T5009.83—2003《食品中胡萝卜素的测定》和NY/T82.15—1988《果汁测定方法 β-胡萝卜素的
测定》。
本标准与GB5413.35—2010相比,主要变化如下:
———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定”;
———增加了普通食品的前处理方法;
———增加了需要区分α-胡萝卜素、β-胡萝卜素的色谱条件;
———修改了胡萝卜素的结果表达。
Ⅰ
GB5009.83—2016
食品安全国家标准
食品中胡萝卜素的测定
1 范围
本标准规定了食品中胡萝卜素的测定方法。
本标准色谱条件一适用于食品中α-胡萝卜素、β-胡萝卜素及总胡萝卜素的测定,色谱条件二适用于
食品中β-胡萝卜素的测定。
2 原理
试样经皂化使胡萝卜素释放为游离态,用石油醚萃取二氯甲烷定容后,采用反相色谱法分离,外标
法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
3.1.2 木瓜蛋白酶:酶活力≥5U/mg。
3.1.3 氢氧化钾(KOH)。
3.1.4 无水硫酸钠(Na2SO4)。
3.1.5 抗坏血酸(C6H8O6)。
3.1.6 石油醚:沸程30℃~60℃。
3.1.7 甲醇(CH4O):色谱纯。
3.1.8 乙腈(C2H3N):色谱纯。
3.1.9 三氯甲烷(CHCl3):色谱纯。
3.1.10 甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]:色谱纯。
3.1.11 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。
3.1.12 无水乙醇(C2H6O):优级纯。
3.1.13 正己烷(C6H14):色谱纯。
3.1.14 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C15H24O,BHT)。
3.2 试剂配制
氢氧化钾溶液:称固体氢氧化钾500g,加入500mL水溶解。临用前配制。
3.3 标准品
3.3.1 α-胡萝卜素(C40H56,CAS号:7488-99-5):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
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GB5009.83—2016
准物质。
3.3.2 β-胡萝卜素(C40H56,CAS号:7235-40-7):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 α-胡萝卜素标准储备液(500μg/mL):准确称取α-胡萝卜素标准品50mg(精确到0.1mg),加入
0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光储存,使
用期限不超过3个月。标准储备液用前需进行标定,具体操作见附录A。
3.4.2 α-胡萝卜素标准中间液(100μg/mL):由α-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于
50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。
3.4.3 β-胡萝卜素标准储备液(500μg/mL):准确称取β-胡萝卜素标准品50mg(精确到0.1mg),加入
0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光储存,使
用期限不超过3个月。标准储备液用前需进行标定,具体操作见附录A。
注:β-胡萝卜素标准品主要为全反式(all-E)β-胡萝卜素,在储存过程中受到温度、氧化等因素的影响,会出现部分
全反式β-胡萝卜素异构化为顺式β-胡萝卜素的现象,如9-顺式(9Z)-β-胡萝卜素、13-顺式(13Z)-β-胡萝卜素、
15-顺式(15Z)-β-胡萝卜素等。如果采用色谱条件一进行β-胡萝卜素的测定,应按照附录B确认β-胡萝卜素异
构体保留时间,并计算全反式β-胡萝卜素标准溶液色谱纯度。
3.4.4 β-胡萝卜素标准中间液(100μg/mL):从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL 溶液于
50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。
3.4.5 α-胡萝卜素、β-胡萝卜素混合标准工作液(色谱条件一用):准确移取α-胡萝卜素标准中间液
0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶,分别加入
3.00mLβ-胡萝卜素中间液,用二氯甲烷定容至刻度,得到α-胡萝卜素浓度分别为0.5μg/mL、
1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10.00μg/mL,β-胡萝卜素浓度均为3.0μg/mL的系列
混合标准工作液。
3.4.6 β-胡萝卜素标准工作液(色谱条件二用):从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50mL、
1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至
刻度,得到浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL的系列标准
工作液。
4 仪器和设备
4.1 匀浆机。
4.2 高速粉碎机。
4.3 恒温振荡水浴箱:控温精度±1℃。
4.4 旋转蒸发器。
4.5 氮吹仪。
4.6 紫外-可见光分光光度计。
4.7 高效液相色谱仪(HPLC仪):带紫外检测器。
5 分析步骤
注:整个实验操作过程应注意避光。
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GB5009.83—2016
5.1 试样制备
谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛(筛板孔径0.3mm~0.5mm);蔬菜、水果、蛋、藻类等试
样用匀质器混匀;固体粉末状试样和液体试样用前振摇或搅拌混匀。4℃冰箱可保存1周。
5.2 试样处理
5.2.1 普通食品试样
5.2.1.1 预处理
蔬菜、水果、菌藻类、谷物、豆类、蛋类等普通食品试样准确称取混合均匀的试样1g~5g(精确至
0.001g),油类准确称取0.2g~2g(精确至0.001g),转至250mL锥形瓶中,加入1g抗坏血酸、75mL
无水乙醇,于60℃±1℃水浴振荡30min。
如果试样中蛋白质、淀粉含量较高(>10%),先加入1g抗坏血酸、15mL45℃~50℃温水、0.5g
木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶,盖上瓶塞混匀后,置55 ℃±1 ℃恒温水浴箱内振荡或超声处理30min
后,再加入75mL无水乙醇,于60℃±1℃水浴振荡30min。
5.2.1.2 皂化
加入25mL氢氧化钾溶液,盖上瓶塞。置于已预热至53℃±2℃恒温振荡水浴箱中,皂化30min。
取出,静置,冷却到室温。
5.2.2 添加β-胡萝卜素的食品试样
5.2.2.1 预处理
固体试样:准确称取1g~5g(精确至0.001g),置于250mL 锥形瓶中,加入1g抗坏血酸,加
50mL45℃~50℃温水混匀。加入0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶(无淀粉试样可以不加α-淀粉
酶),盖上瓶塞,置55℃±1℃恒温水浴箱内振荡或超声处理30min。
液体试样:准确称取5g~10g(精确至0.001g),置于250mL锥形瓶中,加入1g抗坏血酸。
5.2.2.2 皂化
取预处理后试样,加入75mL无水乙醇,摇匀,再加入25mL氢氧化钾溶液,盖上瓶塞。置于已预
热至53℃±2℃恒温振荡水浴箱中,皂化30min。取出,静置,冷却到室温。
注:如皂化不完全可适当延长皂化时间至1h。
5.3 试样萃取
将皂化液转入500mL分液漏斗中,加入100mL石油醚,轻轻摇动,排气,盖好瓶塞,室温下振荡
10min后静置分层,将水相转入另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取。合并有机相,用水洗至
近中性。弃水相,有机相通过无水硫酸钠过滤脱水。滤液收入500 mL 蒸发瓶中,于旋转蒸发器上
40℃±2℃减压浓缩,近干。用氮气吹干,用移液管准确加入5.0mL二氯甲烷,盖上瓶塞,充分溶解提
取物。经0.45μm 膜过滤后,弃出初始约1mL滤液后收集至进样瓶中,备用。
注:必要时可根据待测样液中胡萝卜素含量水平进行浓缩或稀释,使待测样液中α-胡萝卜素和/或β-胡萝卜素浓度
在0.5μg/mL~10μg/mL范围内。
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GB5009.83—2016
5.4 色谱测定
5.4.1 色谱条件一(适用于食品中α-胡萝卜素、β-胡萝卜素及总胡萝卜素的测定)
5.4.1.1 参考色谱条件
参考色谱条件列出如下:
a) 色谱柱:C30柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效柱;
b) 流动相:A 相:甲醇∶乙腈∶水=73.5∶24.5∶2;
B相:甲基叔丁基醚;
表1 梯度程序
时间/min 0 15 18 19 20 22
A% 100 59 20 20 0 100
B% 0 41 80 80 100 0
c) 流速:1.0mL/min;
d) 检测波长:450nm;
e) 柱温:30℃±1℃;
f) 进样体积:20μL。
5.4.1.2 绘制α-胡萝卜素标准曲线、计算全反式β-胡萝卜素响应因子
将α-胡萝卜素、β-胡萝卜素混合标准工作液注入HPLC仪中(色谱图见图C.1),根据保留时间定
性,测定α-胡萝卜素、β-胡萝卜素各异构体峰面积。
α-胡萝卜素根据系列标准工作液浓度及峰面积,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,
计算回归方程。
β-胡萝卜素根据标准工作液标定浓度、全反式β-胡萝卜素6次测定峰面积平均值、全反式β-胡萝卜
素色谱纯度(CP ,计算方法见附录B),按式(1)计算全反式β-胡萝卜素响应因子。
RF =
Aall-E
ρ×CP …………………………(1)
式中:
RF ———全反式β-胡萝卜素响应因子,单位为峰面积毫升每微克(AU·mL/μg);
Aall-E ———全反式β-胡萝卜素标准工作液色谱峰峰面积平均值,单位为峰面积(AU);
ρ ———β-胡萝卜素标准工作液标定浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
CP ———全反式β-胡萝卜素的色谱纯度,%。