T/CSES 152-2024 有机污染场地土壤生物修复技术规范 微生物菌剂使用
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- 更新时间：2025-02-22
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资料介绍
团体标准
T/CSES 152—2024
有机污染场地土壤生物修复技术规范 微生物菌剂使用
Technical specifications for soil bioremediation of organics contaminated sites—Application of microbial cultures
2024-08-05发布
2024-08-05实施
中国环境科学学会 发布
前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由清华大学提出。
本文件由中国环境科学学会归口。
本文件起草单位：清华大学、北京建筑大学、中国科学院微生物研究所、上海康恒环境修复有限公司、清华苏州环境创新研究院。
本文件主要起草人：王慧、高大文、李德峰、王欢、韩建均、林子雨、张作涛、龚小强、王镝翔、李明。
1 范围
本文件规定了有机污染场地土壤生物修复过程中微生物菌剂使用的总体要求、微生物菌剂筛选与制备、应用设计、工程施用、监测与评估。
本文件适用于有机污染场地土壤生物修复过程中的微生物菌剂使用。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
HJ 25.2 建设用地土壤污染风险管控和修复监测技术导则
HJ 25.4 建设用地土壤修复技术导则
HJ 25.5 污染地块风险管控与土壤修复效果评估技术导则（试行）
HJ/T 415 环保用微生物菌剂环境安全评价导则
HJ 632 土壤 总磷的测定 碱熔-钼锑抗分光光度法
HJ 634 土壤 氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法
HJ 695 土壤 有机碳的测定 燃烧氧化-非分散红外法
HJ 717 土壤质量 全氮的测定 凯氏法
HJ 925 便携式溶解氧测定仪技术要求及检测方法
HJ 962 土壤pH值的测定 电位法
HJ 1283 污染土壤修复工程技术规范 生物堆
NY/T 52 土壤水分测定法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。 微生物菌剂 microbial culture 目标微生物（有效功能菌）经过工业化生产扩培，并添加辅助成分后制成的活菌制剂。
外源微生物菌剂 exogenous microbial culture
微生物菌剂（3.1）中由一种或多种从非本土污染环境中，通过人工选育获得的微生物菌种（株），经过加工制成的活菌制剂，可直接应用于适当环境条件下的土壤生物修复。
土著微生物菌剂 indigenous microbial culture
微生物菌剂（3.1）中由一种或多种从受污染土壤本土环境中原位分离纯化，通过人工选育获得的微生物菌种（株），经过加工制成的活菌制品菌剂。
辅助药剂 adjuvant
满足土壤降解菌的需要，提高土壤微生物代谢活性，进而提高修复效率的药剂。
注： 包括提高污染物溶解度的助溶剂、提高微生物活性的营养物、电子受体以及共代谢基质等，利于微生物附着生长的载体物质以及调节土壤性质的调理剂等。
4 总体要求 微生物菌剂的应用应遵循绿色低碳、因地制宜与系统治理原则和绿色可持续修复理念，按照国家相关标准规范进行，具备可行性、有效性和工程适用性，实现减污降碳协同增效。 微生物菌剂的选择、制备和应用方式应根据场地污染特征、修复目标值、生物地球化学条件、水文地质条件、现场试验结果等因素确定，选择的菌剂应具备可行性、有效性和工程适用性。 微生物菌剂应在筛选、分离、鉴定后，扩培、制备前进行环境安全评价，评价要求应符合HJ/T 415的规定。 微生物菌剂适用于石油烃、芳烃（苯系物、多环芳烃等）、部分卤代烃以及其他可生物降解的有机污染场地修复。 微生物菌剂应用应对中低浓度的有机污染土壤具有较好的修复效果，施用后应符合修复目标值。 微生物菌剂应用过程中应对所产生的废气、废水、固体废物及其他污染物进行治理，并达到国家、地方和相关行业排放标准要求。 应在微生物菌剂投加部位就近建立独立的菌剂存储区，在区域内明显的位置张贴警示标志、微生物菌剂用途和注意事项等说明，并设置专人管理。 微生物菌剂的应用流程如图1，包括微生物菌剂筛选与制备、应用设计、工程施用。
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图 1 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图
5 微生物菌剂筛选与制备 一般规定
5.1.1 微生物菌剂筛选包括土著微生物菌剂的筛选、外源微生物菌剂的筛选、菌剂的鉴定和菌剂的扩培、制备。微生物菌剂的筛选应通过小试和中试试验验证菌剂施用可行性和污染物降解有效性。
5.1.2 在场地易富集可降解目标污染物的土著微生物，且小试和中试试验工况下对污染物的降解效果较好的条件下，可采用土著微生物菌剂进行工程施用。其他情况下可采用外源微生物菌剂或两者结合使用。
5.1.3 当场地污染以易降解的有机污染物为主，且土壤透气性好，有利于氧气扩散时，应选择进行好氧筛选；当场地污染以难降解的有机污染物为主，或土壤透气性较差，氧气难以到达深层土壤时，应选择进行厌氧筛选。
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5.1.4 在进行微生物菌剂筛选时，应结合场地污染特征、土壤理化性质、筛选环境因素等影响因素，制定针对性的筛选方案。 土著微生物菌剂筛选
5.2.1 可采用助溶剂辅助配制疏水性污染物溶液用于筛选和驯化优势菌。
5.2.2 对于单一降解菌筛选，可从受有机污染的场地中采集土壤样品，好氧降解菌从表层土壤中筛选，兼性或厌氧降解菌从深层土壤中筛选，以目标污染物为唯一碳源，在模拟场地实际环境条件下进行培养、分离和纯化。
5.2.3 对于混合降解菌筛选，可采用多个单一降解菌经复配实验，获得最优菌群组成和菌株配比。通过实验室液体培养基降解实验或模拟土壤实验评估其降解目标污染物能力，明确污染物降解速率或达到修复目标所需要的时间、菌剂最适宜添加量、营养物添加范围等修复参数。 外源微生物菌剂筛选
5.3.1 选择市售外源微生物菌剂应符合产品标准出厂指标。
5.3.2 外源微生物菌剂应具有将土壤中目标污染物有效降解能力，且不产生对土壤生态有毒害作用的中间代谢产物。
5.3.3 外源微生物菌剂的筛选可结合模拟土壤试验，试验应符合污染场地实地条件，避免因实验室环境理想可控而影响实际应用效果。 微生物菌剂鉴定及储存
5.4.1 土著微生物菌剂宜通过形态学（包括菌落形态、菌丝形态、芽胞形态等特征）、生理生化（包括糖发酵试验、氧化发酵试验、酶活性测定等）以及分子生物学（包括16S rRNA基因测序、DNA指纹图谱分析等）等测定方法确定其分类。外源微生物菌剂应获取属种、生长特性、代谢途径、抗逆性、土壤生物毒性、遗传稳定性等产品规格信息。
5.4.2 微生物菌剂的保藏应根据菌剂特性选择适当的保藏方法和条件，如低温、干燥以及缺氧等。 微生物菌剂产品要求
5.5.1 微生物菌剂产品应按照HJ/T 415进行安全性评价，通过安全性评价则可进行扩培与制备，未通过则应再次筛选。
5.5.2 微生物菌剂产品应符合表1的要求。
表1 产品要求
项目
菌剂类型
液体
固体（粉和颗粒型）
有效活菌数（ CFUsCFUsCFUsCFUs）/（10 8/g 或 10 8/mL/mL/mL）
≥5.0
≥2.0
霉菌杂数 /（个 /g 或个 /mL ）
≤3.0 ×10 6
≤3.0 ×10 6
杂菌率 /（％）
≤10
≤30
pH 值
5.0 ～8.08.08.0
5.5 ～8.58.58.5
活菌的有效期 /≥月
3
6
去除率 /（％）
实验室评估条件下，修复周期内场地污染土壤达标则可接受。 微生物菌剂扩培与制备
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5.6.1 菌剂接种量应根据菌种特性确定，扩培过程中每次放大比例宜为已有菌液量的10倍～20倍，可进行多次扩培。
5.6.2 菌剂的扩培所需培养基应根据菌剂的生理特性，选择适宜的营养成分和配方（包括碳源、氮源、微量元素以及生长因子等），同时应保证培养基营养丰富和均衡、物理性质稳定。
5.6.3 菌剂扩培所需的温度、湿度、pH值、溶氧量等环境参数可通过小试试验确定，菌剂扩培过程中应通过实时监测和调控，保持适宜的培养条件，促进菌株的生长。
5.6.4 菌剂的制备过程中可采用溶解性弱酸、弱碱调节pH值，控制pH值稳定在6～9范围内，同时应根据修复要求和菌种特性，调整工艺参数。
5.6.5 菌剂扩培后微生物浓度应达到108 CFUs/mL以上，生长周期控制在5天～10天，可根据需要添加适量的添加剂和保护剂，保证功能微生物为优势菌。
5.6.6 液体微生物菌剂也可通过固定化的方式制备成固体菌剂。
6 微生物菌剂应用设计 一般规定
6.1.1 应用设计包括辅助药剂选择与投加和微生物菌剂应用工程参数设计。
6.1.2 辅助药剂基本控制参数包括营养物质添加比例、表面活性剂投加比等。
6.1.3 微生物菌剂应用基本工程参数包括土壤性质、有效活菌数、pH值等。 辅助药剂选择与投加
6.2.1 营养物药剂选择与投加
6.2.1.1 应根据污染土壤中成分组成，选择添加营养物药剂，营养物药剂包括氮、磷和其他细胞生长所必需的营养物质，宜将修复土壤的C:N:P摩尔比控制在100:10:1～100:5:1范围内。
6.2.1.2 营养物药剂投加方式和系统应与所采用的修复技术配套。浅层搅拌、生物堆、生物耕作等修复方式下，营养物药剂可采用雾化喷灌、机械投加等方式添加，并搅拌混合；原位注入修复方式下，可通过注入井进行重力注入或压力注入；生物泥浆反应修复方式下，可通过自动配药装置泵送投加，并在泥浆调理罐中混合均匀。
6.2.1.3 添加方式可采用直接添加法（修复开始时直接添加营养物药剂）、循环添加法（修复周期内周期性添加一定量的营养物药剂）以及控制释放法（通过控制营养物药剂的释放速率，使其在一定时间内缓慢释放）等。
6.2.1.4 营养物药剂投加所使用的设备包括滴灌系统、喷雾器或喷雾装置、搅拌机、注射泵、管道输送系统、自动配药装置等。
6.2.2 表面活性剂选择与投加
6.2.2.1 可通过小试和中试试验，确定最优的表面活性剂的类型。
6.2.2.2 在同等促进效果条件下，应优先选择生物合成表面活性剂，推荐添加量为菌剂投加量的0.1％～1％。
6.2.2.3 投加方式和投加设备与6.2.1相同。
6.2.3 电子受体和代谢药剂选择
6.2.3.1 对于浅层土壤的污染物降解，可通过平整、翻抛以及犁作等方式促进生物修复；对于深层土壤的污染物降解，当其缺乏电子受体时，可通过添加氧气或硝酸盐等促进生物修复，其中氧气可通过自然通风（适用于土壤孔隙度较高、渗透性较好的情况）、人工钻井的方式向土壤注入空气。
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6.2.3.2 对于石油烃/芳烃污染土壤，当石油烃/芳烃浓度过高且降解菌含量较低导致降解速率缓慢时，可加入表2中相应的小分子酸、小分子醇、小分子糖以及特定氨基酸等作为共代谢基质，共代谢基质加入的量根据土壤的污染状况可通过小试和中试试验确定。
6.2.3.3 对于卤代烃污染土壤，当进行厌氧还原修复时，可添加表2中相应的有机碳源，促进厌氧代谢，此时卤代烃即为电子受体。
表 2 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂
生物降解类型
典型污染物
典型的添加剂
好氧化
石油烃
、芳空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 营养、磷酸盐铵以及钾等
厌氧化
石油烃
、芳硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 盐等
共代谢氧化
石油烃
、芳乙酸盐、丙柠檬苹果葡萄糖木甘露醇甲谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 甲基异丙苯等
厌氧还原
卤代烃
甲酸、乙糖类食用油等有机碳添加剂 微生物菌剂应用工程参数设计
6.3.1 工程参数设计应收集土壤孔隙度、湿度、渗透系数、有机质含量、有效活菌数、电子受体/供体含量和土著微生物群落组成等相关信息和资料，需要收集的设计资料见附录A中表A.1。
6.3.2 参照HJ 25.4，可根据修复土壤有机污染浓度和空间分布等信息选择原位或异位修复模式和技术，微生物菌剂修复技术推荐见表3。
表 3 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术
污染类型
包气带
饱和含水层
原位修复
异位修复
原位修复
异位修复
芳烃
浅层搅拌
生物泥浆反应、生物堆、生物耕作
注入井
生物泥浆反应、生物堆
卤代烃
/
/
注入井
/
石油烃
浅层搅拌
生物堆、生物泥浆反应、生物耕作
注入井
生物堆
注： “/”表示不推荐使用微生物修复。
6.3.3 菌剂使用的基本指标应符合表1的要求，菌剂投加后有效活菌数不应低于104 CFUs/g，土壤pH值应维持在6.0～9.0。可根据有效降解目标污染物时的营养条件、环境理化条件，调整菌剂工程施用的参数范围。
6.3.4 现场进行小试或中试试验，在加入菌剂后，可考虑补充生物菌剂投加和营养物投加，定期对主要目标污染物的降解效率进行监测，取降解效率最好的实验组菌剂及辅助药剂配置，作为工程施用时的目标参数。
6.3.5 对于菌剂原位应用，可通过设定不同梯度值或不同种类进行单因素试验，取污染物有效降解的实验组确定土壤修复区域应满足的温度、pH值、盐度、氮源、磷源等参数。
6.3.6 对于菌剂异位应用，可通过正交或单因素试验确定修复装置应满足的温度、菌剂浓度、含水率、有机质含量、通风频率等参数。
6.3.7 由多种降解菌或以结合其它本土功能菌株（如土壤改良菌、产表面活性剂菌）的形式应用于
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污染土壤时，根据配伍菌群的污染物降解率调整营养物投加配比和环境条件参数。
7 微生物菌剂工程施用 一般规定
7.1.1 微生物菌剂可通过浅层搅拌、原位注入、生物堆、生物泥浆反应、生物耕作等原位或异位修复技术，进行工程施用。
7.1.2 在适宜微生物生长和有效降解污染物的工程参数条件下，菌剂培养液与水按照质量比1:50配置菌剂溶液并添加辅助药剂。
7.1.3 定期采集土壤进行监测和动态调整，若有机污染浓度超过一个月保持不变且未有修复效果，则应进一步投加营养物质或继续对外源菌剂进行驯化（按照碳氮磷元素化学计量比100:10:1少量多次投加），直至生物修复终止。
7.1.4 在施用过程中，宜考虑实际工程地质条件，采取覆盖保湿、调节温度、pH值等措施，以维持适宜微生物生长的环境条件，定期采样监测，通过追加菌剂或助剂维持土壤有效活菌数。 菌剂修复原位应用
7.2.1 浅层搅拌修复
7.2.1.1 浅层搅拌适用于好氧氧化修复，可采用表面喷淋法投加菌剂。修复前应进行土壤预处理，对修复区土壤进行人工或机械混匀，尽可能打碎其中的土块，去除大石块。
7.2.1.2 应将菌剂用喷雾器均匀地接入修复区土壤中，根据原土中营养成分和培养基成分比例，调节场地中营养元素。
7.2.1.3 应调节土壤饱和持水度至80％～90％。可根据土壤面积、目标含水率以及土壤的保水能力，计算所需的喷淋水量，保证土壤表面无大面积积水或菌液外流。
7.2.1.4 喷洒后土壤中有效活菌数达到设计要求时，可根据修复效果只添加外源营养物质；若有效活菌数低于104 CFUs/g，应同时添加营养物质与外源微生物菌剂，有效活菌数的监测频率不低于每月1次。应定期对土壤进行搅拌、喷施营养剂，助剂添加方式见6.2。
7.2.2 原位注入修复
7.2.2.1 原位注入适用于好氧氧化、厌氧氧化和卤代烃的厌氧还原修复，可采用注入井泵送法投加菌剂。
7.2.2.2 可根据渗透系数等确定布设的注入井间距，同时应确定水泵参数。
7.2.2.3 对于好氧氧化修复，可通过井内曝气、生物通风、注入过氧化物等创造地下有氧环境；对于厌氧氧化修复，可注入硝酸盐等作为电子受体。
7.2.2.4 对于卤代烃的厌氧还原修复，可注入有机碳类辅助药剂，维持厌氧条件并作为电子供体促进降解。
7.2.2.5 监测井可设置在污染严重区域和注入薄弱点位，定期采集土壤和地下水样品分析修复有效活菌数、污染浓度、水质情况。采集监测频率不低于每月1次。
7.2.2.6 可根据监测结果，利用注入井多次追加施用菌剂，保持土壤中有效活菌数，确保菌剂一直处于优势地位，直至修复达标。 菌剂修复异位应用
7.3.1 生物堆、生物泥浆反应和生物耕作适用于好氧氧化修复。
7.3.2 生物堆菌剂施用和修复过程应符合HJ 1283的相关要求，可通过滴灌、喷淋等方式投加菌剂，堆体土壤采集监测频率不低于每周1次，应分析堆体降解微生物数量。
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7.3.3 采用生物泥浆反应修复时，可通过自动配药装置向泥浆调节罐泵送微生物菌剂及辅助药剂，在反应期间应监测反应温度、pH值、含氧量、有效活菌数等，监测频率不低于每周1次。
7.3.4 采用生物耕作修复时，可通过工程机械将微生物菌剂和污染土壤拌匀，应定期进行翻抛和采样监测，监测频率不低于每周1次。
8 监测与评估 工艺参数监测
微生物菌剂施用过程中，应对土壤的生物地球化学指标、细菌总数等菌剂应用相关工艺参数进行监测，分析微生物生长和修复情况。监测项目、监测频率、分析方法见表4。
表 4 工艺参数监测 工艺参数监测 工艺参数监测
序号
监测项目
监测频率
分析方法
引用标准
1
有效活菌数
原位修复方式下，不低于每月1次；异位修复方式下，不低于每周1次
宜采用平板计数法、熏蒸系列方法、底物诱导系列方法、成分分析法和比色法等分子生物学的检测方法
—
2
pH值
≥2 次/周
pH计
HJ 962
3
溶解氧
≥2 次/周
荧光法
HJ 925
4
有机碳含量
≥2 次/月
燃烧氧化法
HJ 695
5
全氮
≥2 次/月
凯式法
HJ 717
6
氨氮、亚硝氮、硝氮
≥2 次/月
分光光度法
HJ 634
7
总磷
≥2 次/月
抗分光光度法
HJ 632
8
含水率
≥2 次/周
烘干法
NY/T 52 环境监测
8.2.1 微生物菌剂修复过程中环境管理措施参照HJ 25.4。
8.2.2 应对修复过程中的废水、废气排放口进行布点监测，监测布点和监测指标参照HJ 25.2执行。
8.2.3 在修复过程中，应定期使用便携式分析仪器设备监测分析修复区及场界周边空气中的挥发性有机物。 微生物菌剂效果评估
8.3.1 修复自检和效果评估应按照HJ 25.5相关规定进行，土壤采样节点、采样点数量、监测因子、修复目标污染物及潜在二次污染物等参数和指标应满足HJ 25.5的技术要求。
8.3.2 微生物菌剂使用过程中，应采集土壤样品，分析目标污染物浓度和次生代谢产物，评估污染物降解趋势和污染物的浓度变化，若发现土壤修复未达到预期目标，可根据土壤性质的变化和污染物的降解效率，调整菌剂的投加量、使用频率以及营养物投加量，直到满足修复效果目标。
8.3.3 针对微生物菌剂在降解过程中产生的次生代谢产物，应采用适当的生态毒理测试方法（如急性毒性测试、慢性毒性测试等），参照HJ 25.5的要求，评估次生代谢产物对土壤生态系统的影响。测试过程中应关注对土壤微生物、植物和动物等生物群落的影响。
8.3.4 微生物菌剂使用后，应对土壤理化性质（包括土壤质地、孔隙度、有机质含量、养分含量等）、土壤微生物群落的数量和多样性进行评估，具体参数见附录A中表A.2。
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A
A 附录A （资料性） 微生物菌剂应用设计与过程监测环境参数
表 A.1 A.1给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 A.2A.2 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 参数。
表 A.1 A.1 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数
参数
相关测量方法
单位
土壤含水率
烘干法
％
菌剂微生物浓度
Q-PCR 法
％
目标污染物浓度
气相色谱 -质谱法
mg/kgmg/kgmg/kgmg/kgmg/kg
温度
温度计
℃
pH 值
pH 计
—
氮源
分光度法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
磷源
过硫酸钾氧化法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
溶解氧
碘量法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
土壤渗透系数
含水层测试
；渗透土壤水的重量占其干百分数 （％）
土壤有机质含量
燃烧法
重量百分数
生物群落组成
高通量测序
—
表 A.2 A.2 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数
参数
相关测量方法
单位
土壤有机质含量
燃烧法
重量百分数
有机污染物浓度
气相色谱 -质谱法
mg/kgmg/kgmg/kgmg/kgmg/kg
土壤中氧气含量
荧光法
、电极mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
生物群落组成
高通量测序
—
微生物活性
吸氧速率分析
；使脱氢活性在一定时间内消耗的氧气量
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前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由清华大学提出。
本文件由中国环境科学学会归口。
本文件起草单位：清华大学、北京建筑大学、中国科学院微生物研究所、上海康恒环境修复有限公司、清华苏州环境创新研究院。
本文件主要起草人：王慧、高大文、李德峰、王欢、韩建均、林子雨、张作涛、龚小强、王镝翔、李明。
1 范围
本文件规定了有机污染场地土壤生物修复过程中微生物菌剂使用的总体要求、微生物菌剂筛选与制备、应用设计、工程施用、监测与评估。
本文件适用于有机污染场地土壤生物修复过程中的微生物菌剂使用。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
HJ 25.2 建设用地土壤污染风险管控和修复监测技术导则
HJ 25.4 建设用地土壤修复技术导则
HJ 25.5 污染地块风险管控与土壤修复效果评估技术导则（试行）
HJ/T 415 环保用微生物菌剂环境安全评价导则
HJ 632 土壤 总磷的测定 碱熔-钼锑抗分光光度法
HJ 634 土壤 氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法
HJ 695 土壤 有机碳的测定 燃烧氧化-非分散红外法
HJ 717 土壤质量 全氮的测定 凯氏法
HJ 925 便携式溶解氧测定仪技术要求及检测方法
HJ 962 土壤pH值的测定 电位法
HJ 1283 污染土壤修复工程技术规范 生物堆
NY/T 52 土壤水分测定法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。 微生物菌剂 microbial culture 目标微生物（有效功能菌）经过工业化生产扩培，并添加辅助成分后制成的活菌制剂。
外源微生物菌剂 exogenous microbial culture
微生物菌剂（3.1）中由一种或多种从非本土污染环境中，通过人工选育获得的微生物菌种（株），经过加工制成的活菌制剂，可直接应用于适当环境条件下的土壤生物修复。
土著微生物菌剂 indigenous microbial culture
微生物菌剂（3.1）中由一种或多种从受污染土壤本土环境中原位分离纯化，通过人工选育获得的微生物菌种（株），经过加工制成的活菌制品菌剂。
辅助药剂 adjuvant
满足土壤降解菌的需要，提高土壤微生物代谢活性，进而提高修复效率的药剂。
注： 包括提高污染物溶解度的助溶剂、提高微生物活性的营养物、电子受体以及共代谢基质等，利于微生物附着生长的载体物质以及调节土壤性质的调理剂等。
4 总体要求 微生物菌剂的应用应遵循绿色低碳、因地制宜与系统治理原则和绿色可持续修复理念，按照国家相关标准规范进行，具备可行性、有效性和工程适用性，实现减污降碳协同增效。 微生物菌剂的选择、制备和应用方式应根据场地污染特征、修复目标值、生物地球化学条件、水文地质条件、现场试验结果等因素确定，选择的菌剂应具备可行性、有效性和工程适用性。 微生物菌剂应在筛选、分离、鉴定后，扩培、制备前进行环境安全评价，评价要求应符合HJ/T 415的规定。 微生物菌剂适用于石油烃、芳烃（苯系物、多环芳烃等）、部分卤代烃以及其他可生物降解的有机污染场地修复。 微生物菌剂应用应对中低浓度的有机污染土壤具有较好的修复效果，施用后应符合修复目标值。 微生物菌剂应用过程中应对所产生的废气、废水、固体废物及其他污染物进行治理，并达到国家、地方和相关行业排放标准要求。 应在微生物菌剂投加部位就近建立独立的菌剂存储区，在区域内明显的位置张贴警示标志、微生物菌剂用途和注意事项等说明，并设置专人管理。 微生物菌剂的应用流程如图1，包括微生物菌剂筛选与制备、应用设计、工程施用。
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图 1 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图 微生物菌剂应用流程图
5 微生物菌剂筛选与制备 一般规定
5.1.1 微生物菌剂筛选包括土著微生物菌剂的筛选、外源微生物菌剂的筛选、菌剂的鉴定和菌剂的扩培、制备。微生物菌剂的筛选应通过小试和中试试验验证菌剂施用可行性和污染物降解有效性。
5.1.2 在场地易富集可降解目标污染物的土著微生物，且小试和中试试验工况下对污染物的降解效果较好的条件下，可采用土著微生物菌剂进行工程施用。其他情况下可采用外源微生物菌剂或两者结合使用。
5.1.3 当场地污染以易降解的有机污染物为主，且土壤透气性好，有利于氧气扩散时，应选择进行好氧筛选；当场地污染以难降解的有机污染物为主，或土壤透气性较差，氧气难以到达深层土壤时，应选择进行厌氧筛选。
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5.1.4 在进行微生物菌剂筛选时，应结合场地污染特征、土壤理化性质、筛选环境因素等影响因素，制定针对性的筛选方案。 土著微生物菌剂筛选
5.2.1 可采用助溶剂辅助配制疏水性污染物溶液用于筛选和驯化优势菌。
5.2.2 对于单一降解菌筛选，可从受有机污染的场地中采集土壤样品，好氧降解菌从表层土壤中筛选，兼性或厌氧降解菌从深层土壤中筛选，以目标污染物为唯一碳源，在模拟场地实际环境条件下进行培养、分离和纯化。
5.2.3 对于混合降解菌筛选，可采用多个单一降解菌经复配实验，获得最优菌群组成和菌株配比。通过实验室液体培养基降解实验或模拟土壤实验评估其降解目标污染物能力，明确污染物降解速率或达到修复目标所需要的时间、菌剂最适宜添加量、营养物添加范围等修复参数。 外源微生物菌剂筛选
5.3.1 选择市售外源微生物菌剂应符合产品标准出厂指标。
5.3.2 外源微生物菌剂应具有将土壤中目标污染物有效降解能力，且不产生对土壤生态有毒害作用的中间代谢产物。
5.3.3 外源微生物菌剂的筛选可结合模拟土壤试验，试验应符合污染场地实地条件，避免因实验室环境理想可控而影响实际应用效果。 微生物菌剂鉴定及储存
5.4.1 土著微生物菌剂宜通过形态学（包括菌落形态、菌丝形态、芽胞形态等特征）、生理生化（包括糖发酵试验、氧化发酵试验、酶活性测定等）以及分子生物学（包括16S rRNA基因测序、DNA指纹图谱分析等）等测定方法确定其分类。外源微生物菌剂应获取属种、生长特性、代谢途径、抗逆性、土壤生物毒性、遗传稳定性等产品规格信息。
5.4.2 微生物菌剂的保藏应根据菌剂特性选择适当的保藏方法和条件，如低温、干燥以及缺氧等。 微生物菌剂产品要求
5.5.1 微生物菌剂产品应按照HJ/T 415进行安全性评价，通过安全性评价则可进行扩培与制备，未通过则应再次筛选。
5.5.2 微生物菌剂产品应符合表1的要求。
表1 产品要求
项目
菌剂类型
液体
固体（粉和颗粒型）
有效活菌数（ CFUsCFUsCFUsCFUs）/（10 8/g 或 10 8/mL/mL/mL）
≥5.0
≥2.0
霉菌杂数 /（个 /g 或个 /mL ）
≤3.0 ×10 6
≤3.0 ×10 6
杂菌率 /（％）
≤10
≤30
pH 值
5.0 ～8.08.08.0
5.5 ～8.58.58.5
活菌的有效期 /≥月
3
6
去除率 /（％）
实验室评估条件下，修复周期内场地污染土壤达标则可接受。 微生物菌剂扩培与制备
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5.6.1 菌剂接种量应根据菌种特性确定，扩培过程中每次放大比例宜为已有菌液量的10倍～20倍，可进行多次扩培。
5.6.2 菌剂的扩培所需培养基应根据菌剂的生理特性，选择适宜的营养成分和配方（包括碳源、氮源、微量元素以及生长因子等），同时应保证培养基营养丰富和均衡、物理性质稳定。
5.6.3 菌剂扩培所需的温度、湿度、pH值、溶氧量等环境参数可通过小试试验确定，菌剂扩培过程中应通过实时监测和调控，保持适宜的培养条件，促进菌株的生长。
5.6.4 菌剂的制备过程中可采用溶解性弱酸、弱碱调节pH值，控制pH值稳定在6～9范围内，同时应根据修复要求和菌种特性，调整工艺参数。
5.6.5 菌剂扩培后微生物浓度应达到108 CFUs/mL以上，生长周期控制在5天～10天，可根据需要添加适量的添加剂和保护剂，保证功能微生物为优势菌。
5.6.6 液体微生物菌剂也可通过固定化的方式制备成固体菌剂。
6 微生物菌剂应用设计 一般规定
6.1.1 应用设计包括辅助药剂选择与投加和微生物菌剂应用工程参数设计。
6.1.2 辅助药剂基本控制参数包括营养物质添加比例、表面活性剂投加比等。
6.1.3 微生物菌剂应用基本工程参数包括土壤性质、有效活菌数、pH值等。 辅助药剂选择与投加
6.2.1 营养物药剂选择与投加
6.2.1.1 应根据污染土壤中成分组成，选择添加营养物药剂，营养物药剂包括氮、磷和其他细胞生长所必需的营养物质，宜将修复土壤的C:N:P摩尔比控制在100:10:1～100:5:1范围内。
6.2.1.2 营养物药剂投加方式和系统应与所采用的修复技术配套。浅层搅拌、生物堆、生物耕作等修复方式下，营养物药剂可采用雾化喷灌、机械投加等方式添加，并搅拌混合；原位注入修复方式下，可通过注入井进行重力注入或压力注入；生物泥浆反应修复方式下，可通过自动配药装置泵送投加，并在泥浆调理罐中混合均匀。
6.2.1.3 添加方式可采用直接添加法（修复开始时直接添加营养物药剂）、循环添加法（修复周期内周期性添加一定量的营养物药剂）以及控制释放法（通过控制营养物药剂的释放速率，使其在一定时间内缓慢释放）等。
6.2.1.4 营养物药剂投加所使用的设备包括滴灌系统、喷雾器或喷雾装置、搅拌机、注射泵、管道输送系统、自动配药装置等。
6.2.2 表面活性剂选择与投加
6.2.2.1 可通过小试和中试试验，确定最优的表面活性剂的类型。
6.2.2.2 在同等促进效果条件下，应优先选择生物合成表面活性剂，推荐添加量为菌剂投加量的0.1％～1％。
6.2.2.3 投加方式和投加设备与6.2.1相同。
6.2.3 电子受体和代谢药剂选择
6.2.3.1 对于浅层土壤的污染物降解，可通过平整、翻抛以及犁作等方式促进生物修复；对于深层土壤的污染物降解，当其缺乏电子受体时，可通过添加氧气或硝酸盐等促进生物修复，其中氧气可通过自然通风（适用于土壤孔隙度较高、渗透性较好的情况）、人工钻井的方式向土壤注入空气。
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6.2.3.2 对于石油烃/芳烃污染土壤，当石油烃/芳烃浓度过高且降解菌含量较低导致降解速率缓慢时，可加入表2中相应的小分子酸、小分子醇、小分子糖以及特定氨基酸等作为共代谢基质，共代谢基质加入的量根据土壤的污染状况可通过小试和中试试验确定。
6.2.3.3 对于卤代烃污染土壤，当进行厌氧还原修复时，可添加表2中相应的有机碳源，促进厌氧代谢，此时卤代烃即为电子受体。
表 2 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂 土壤原位生物修复工程中常用的添加剂
生物降解类型
典型污染物
典型的添加剂
好氧化
石油烃
、芳空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 空气、氧双水二化镁（剂）麦秸以及啤酒厂残渣等有机 营养、磷酸盐铵以及钾等
厌氧化
石油烃
、芳硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 硝酸盐、碳麦秸以及啤酒厂残渣等有机营养磷铵钾 盐等
共代谢氧化
石油烃
、芳乙酸盐、丙柠檬苹果葡萄糖木甘露醇甲谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 谷氨酸、异亮甲硫色苯盐香芹酮二戊烯以及 甲基异丙苯等
厌氧还原
卤代烃
甲酸、乙糖类食用油等有机碳添加剂 微生物菌剂应用工程参数设计
6.3.1 工程参数设计应收集土壤孔隙度、湿度、渗透系数、有机质含量、有效活菌数、电子受体/供体含量和土著微生物群落组成等相关信息和资料，需要收集的设计资料见附录A中表A.1。
6.3.2 参照HJ 25.4，可根据修复土壤有机污染浓度和空间分布等信息选择原位或异位修复模式和技术，微生物菌剂修复技术推荐见表3。
表 3 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术 微生物菌剂修复技术
污染类型
包气带
饱和含水层
原位修复
异位修复
原位修复
异位修复
芳烃
浅层搅拌
生物泥浆反应、生物堆、生物耕作
注入井
生物泥浆反应、生物堆
卤代烃
/
/
注入井
/
石油烃
浅层搅拌
生物堆、生物泥浆反应、生物耕作
注入井
生物堆
注： “/”表示不推荐使用微生物修复。
6.3.3 菌剂使用的基本指标应符合表1的要求，菌剂投加后有效活菌数不应低于104 CFUs/g，土壤pH值应维持在6.0～9.0。可根据有效降解目标污染物时的营养条件、环境理化条件，调整菌剂工程施用的参数范围。
6.3.4 现场进行小试或中试试验，在加入菌剂后，可考虑补充生物菌剂投加和营养物投加，定期对主要目标污染物的降解效率进行监测，取降解效率最好的实验组菌剂及辅助药剂配置，作为工程施用时的目标参数。
6.3.5 对于菌剂原位应用，可通过设定不同梯度值或不同种类进行单因素试验，取污染物有效降解的实验组确定土壤修复区域应满足的温度、pH值、盐度、氮源、磷源等参数。
6.3.6 对于菌剂异位应用，可通过正交或单因素试验确定修复装置应满足的温度、菌剂浓度、含水率、有机质含量、通风频率等参数。
6.3.7 由多种降解菌或以结合其它本土功能菌株（如土壤改良菌、产表面活性剂菌）的形式应用于
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污染土壤时，根据配伍菌群的污染物降解率调整营养物投加配比和环境条件参数。
7 微生物菌剂工程施用 一般规定
7.1.1 微生物菌剂可通过浅层搅拌、原位注入、生物堆、生物泥浆反应、生物耕作等原位或异位修复技术，进行工程施用。
7.1.2 在适宜微生物生长和有效降解污染物的工程参数条件下，菌剂培养液与水按照质量比1:50配置菌剂溶液并添加辅助药剂。
7.1.3 定期采集土壤进行监测和动态调整，若有机污染浓度超过一个月保持不变且未有修复效果，则应进一步投加营养物质或继续对外源菌剂进行驯化（按照碳氮磷元素化学计量比100:10:1少量多次投加），直至生物修复终止。
7.1.4 在施用过程中，宜考虑实际工程地质条件，采取覆盖保湿、调节温度、pH值等措施，以维持适宜微生物生长的环境条件，定期采样监测，通过追加菌剂或助剂维持土壤有效活菌数。 菌剂修复原位应用
7.2.1 浅层搅拌修复
7.2.1.1 浅层搅拌适用于好氧氧化修复，可采用表面喷淋法投加菌剂。修复前应进行土壤预处理，对修复区土壤进行人工或机械混匀，尽可能打碎其中的土块，去除大石块。
7.2.1.2 应将菌剂用喷雾器均匀地接入修复区土壤中，根据原土中营养成分和培养基成分比例，调节场地中营养元素。
7.2.1.3 应调节土壤饱和持水度至80％～90％。可根据土壤面积、目标含水率以及土壤的保水能力，计算所需的喷淋水量，保证土壤表面无大面积积水或菌液外流。
7.2.1.4 喷洒后土壤中有效活菌数达到设计要求时，可根据修复效果只添加外源营养物质；若有效活菌数低于104 CFUs/g，应同时添加营养物质与外源微生物菌剂，有效活菌数的监测频率不低于每月1次。应定期对土壤进行搅拌、喷施营养剂，助剂添加方式见6.2。
7.2.2 原位注入修复
7.2.2.1 原位注入适用于好氧氧化、厌氧氧化和卤代烃的厌氧还原修复，可采用注入井泵送法投加菌剂。
7.2.2.2 可根据渗透系数等确定布设的注入井间距，同时应确定水泵参数。
7.2.2.3 对于好氧氧化修复，可通过井内曝气、生物通风、注入过氧化物等创造地下有氧环境；对于厌氧氧化修复，可注入硝酸盐等作为电子受体。
7.2.2.4 对于卤代烃的厌氧还原修复，可注入有机碳类辅助药剂，维持厌氧条件并作为电子供体促进降解。
7.2.2.5 监测井可设置在污染严重区域和注入薄弱点位，定期采集土壤和地下水样品分析修复有效活菌数、污染浓度、水质情况。采集监测频率不低于每月1次。
7.2.2.6 可根据监测结果，利用注入井多次追加施用菌剂，保持土壤中有效活菌数，确保菌剂一直处于优势地位，直至修复达标。 菌剂修复异位应用
7.3.1 生物堆、生物泥浆反应和生物耕作适用于好氧氧化修复。
7.3.2 生物堆菌剂施用和修复过程应符合HJ 1283的相关要求，可通过滴灌、喷淋等方式投加菌剂，堆体土壤采集监测频率不低于每周1次，应分析堆体降解微生物数量。
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7.3.3 采用生物泥浆反应修复时，可通过自动配药装置向泥浆调节罐泵送微生物菌剂及辅助药剂，在反应期间应监测反应温度、pH值、含氧量、有效活菌数等，监测频率不低于每周1次。
7.3.4 采用生物耕作修复时，可通过工程机械将微生物菌剂和污染土壤拌匀，应定期进行翻抛和采样监测，监测频率不低于每周1次。
8 监测与评估 工艺参数监测
微生物菌剂施用过程中，应对土壤的生物地球化学指标、细菌总数等菌剂应用相关工艺参数进行监测，分析微生物生长和修复情况。监测项目、监测频率、分析方法见表4。
表 4 工艺参数监测 工艺参数监测 工艺参数监测
序号
监测项目
监测频率
分析方法
引用标准
1
有效活菌数
原位修复方式下，不低于每月1次；异位修复方式下，不低于每周1次
宜采用平板计数法、熏蒸系列方法、底物诱导系列方法、成分分析法和比色法等分子生物学的检测方法
—
2
pH值
≥2 次/周
pH计
HJ 962
3
溶解氧
≥2 次/周
荧光法
HJ 925
4
有机碳含量
≥2 次/月
燃烧氧化法
HJ 695
5
全氮
≥2 次/月
凯式法
HJ 717
6
氨氮、亚硝氮、硝氮
≥2 次/月
分光光度法
HJ 634
7
总磷
≥2 次/月
抗分光光度法
HJ 632
8
含水率
≥2 次/周
烘干法
NY/T 52 环境监测
8.2.1 微生物菌剂修复过程中环境管理措施参照HJ 25.4。
8.2.2 应对修复过程中的废水、废气排放口进行布点监测，监测布点和监测指标参照HJ 25.2执行。
8.2.3 在修复过程中，应定期使用便携式分析仪器设备监测分析修复区及场界周边空气中的挥发性有机物。 微生物菌剂效果评估
8.3.1 修复自检和效果评估应按照HJ 25.5相关规定进行，土壤采样节点、采样点数量、监测因子、修复目标污染物及潜在二次污染物等参数和指标应满足HJ 25.5的技术要求。
8.3.2 微生物菌剂使用过程中，应采集土壤样品，分析目标污染物浓度和次生代谢产物，评估污染物降解趋势和污染物的浓度变化，若发现土壤修复未达到预期目标，可根据土壤性质的变化和污染物的降解效率，调整菌剂的投加量、使用频率以及营养物投加量，直到满足修复效果目标。
8.3.3 针对微生物菌剂在降解过程中产生的次生代谢产物，应采用适当的生态毒理测试方法（如急性毒性测试、慢性毒性测试等），参照HJ 25.5的要求，评估次生代谢产物对土壤生态系统的影响。测试过程中应关注对土壤微生物、植物和动物等生物群落的影响。
8.3.4 微生物菌剂使用后，应对土壤理化性质（包括土壤质地、孔隙度、有机质含量、养分含量等）、土壤微生物群落的数量和多样性进行评估，具体参数见附录A中表A.2。
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A
A 附录A （资料性） 微生物菌剂应用设计与过程监测环境参数
表 A.1 A.1给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 给出了微生物菌剂应用设计涉及的环境参数，表 A.2A.2 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 给出了菌剂应用过程监测涉及的环境 参数。
表 A.1 A.1 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数 微生物菌剂应用设计涉及的环境参数
参数
相关测量方法
单位
土壤含水率
烘干法
％
菌剂微生物浓度
Q-PCR 法
％
目标污染物浓度
气相色谱 -质谱法
mg/kgmg/kgmg/kgmg/kgmg/kg
温度
温度计
℃
pH 值
pH 计
—
氮源
分光度法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
磷源
过硫酸钾氧化法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
溶解氧
碘量法
mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
土壤渗透系数
含水层测试
；渗透土壤水的重量占其干百分数 （％）
土壤有机质含量
燃烧法
重量百分数
生物群落组成
高通量测序
—
表 A.2 A.2 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数 菌剂应用过程监测涉及的环境参数
参数
相关测量方法
单位
土壤有机质含量
燃烧法
重量百分数
有机污染物浓度
气相色谱 -质谱法
mg/kgmg/kgmg/kgmg/kgmg/kg
土壤中氧气含量
荧光法
、电极mg/Lmg/Lmg/Lmg/L
生物群落组成
高通量测序
—
微生物活性
吸氧速率分析
；使脱氢活性在一定时间内消耗的氧气量