DB32/T 5062-2025 人类肠道菌群样本制备和保藏技术规范

江苏省人类肠道菌群样本制备与保藏技术规范总结

一、适用范围

本规范适用于人类肠道菌群样本的采集、制备、质量控制、保藏及数据管理全过程，适用于生物样本库及相关医疗机构。

二、核心要求

1. ​实验室与人员资质​

   • 需符合BSL-2实验室标准，设备与环境无菌，人员需通过专业培训并具备相关资质。
   • 建立质量管理体系，覆盖样本采集、处理、质控及保藏全流程。

2. ​伦理与隐私​

   • 项目需通过伦理审查，捐赠人需签署知情同意书，明确风险、用途及隐私保护政策。
   • 数据管理遵循《健康医疗数据安全指南》（GB/T 39725），确保个人信息安全。

三、样本采集与处理流程

1. ​粪便样本采集​

   • ​操作要求​：使用无菌容器采集≥100g粪便，30分钟内启动制备，全程不超过2小时。
   • ​采集环境​：推荐邻近实验室的洁净蹲式便器，避免尿液、污水污染。

2. ​质量控制标准​

   • ​性状筛选​：仅接受布里斯托3-5型粪便（香肠状至软块状）。
   • ​微生物检测​：每批次检测寄生虫、致病菌（如沙门氏菌、霍乱弧菌）、病毒（轮状病毒）等12项指标（表1），长期捐赠者每2月额外检测菌群多样性及特定病原体（表2）。

3. ​不合格处理​

   • 不合格样本（含污染或检测阳性）单独存放并销毁，相关记录需完整。

四、肠道菌群样本制备

1. ​制备步骤​

   • ​稀释与均质​：粪便与无菌生理盐水按1:3-5混合，450-900r/min搅拌10分钟。
   • ​过滤离心​：200目过滤去渣，4500r/min离心5分钟，去上清后二次离心。
   • ​分装形式​：
     • ​菌液​：1g菌泥+10mL保存液，50mL/管分装。
     • ​干粉胶囊​：冻干后灌装，0.5g/粒（平板或旋转冻干法）。
     • ​液体胶囊​：菌液注入明胶胶囊，0.5mL/粒。

2. ​质控指标​

   • ​外观​：菌液需悬浊均匀，胶囊无破损。
   • ​活菌数​：菌液≥2.5×10¹²个/50mL，干粉≥1×10¹⁰个/g。
   • ​活性​：菌液≥80%，干粉≥70%（流式细胞法检测）。

五、保藏管理

1. ​保存条件与期限​
   • -20℃保存最长1个月，-80℃最长12个月；留样需-80℃保存≥12个月。
   • 超期样本须销毁并记录。

六、数据管理

1. ​记录内容​

   • 涵盖伦理文件、捐赠人信息、样本采集/制备/质控/保藏全流程数据（附录B）。
   • 突发事件处理记录需完整（如设备故障、样本污染）。

2. ​数据安全​

   • 数据清洗（补缺、纠错、去重）后存储，原数据与备份保存≥20年。
   • 传输过程需加密，防止隐私泄露。

七、附录与参考文献

• ​布里斯托分类法​（附录A）：图文描述7类粪便性状，指导样本筛选。
• ​数据记录模板​（附录B）：标准化表格确保信息完整可追溯。
• ​参考文献​：引用国内外权威指南及研究，支撑技术规范的科学性（如欧洲粪菌移植共识、中国专家共识等）。

关键亮点

• ​全流程标准化​：从采集到保藏，每环节均设定量化指标（如时间、温度、活菌数）。
• ​双重质控​：批次检测+长期捐赠者定期复测，确保样本安全性。
• ​多样本形式​：支持菌液、干粉/液体胶囊，适应不同应用场景。
• ​伦理与安全并重​：强调知情同意、数据加密及不合格样本销毁，兼顾科学性与合规性。